fkbp12.6在小鼠腦缺血損傷中的作用及cdc42缺失對小鼠攝食的影響

1、Roles of FKBP12.6 in brain ischemia injury of mice and effects of CDC42-deficiency on food intake in miceA Dissertation PresentedByMing WanMajor: Biochemistry and molecular biologySupervisor: Professor Hong-bo XinSubmitt

2、ed to the Graduate School of NanchangUniversity for the Degree ofMASTER OF SCIENCEJune, 2015School of Medicine, Nanchang University,Nanchang, 330088, P. R. China摘要II摘 要 摘 要目的： 目的：FKBP12.6 即 FK506 結(jié)合蛋白 12.6，是一種能與免疫抑制劑 FK5

3、06結(jié)合、 大小為 12.6 KD 的蛋白質(zhì)。 它可以和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣離子釋放通道 RyR2 結(jié)合，從而使 RyR2 穩(wěn)定地處于關(guān)閉狀態(tài)，在穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡中發(fā)揮重要作用。腦缺血是中風(fēng)的一種，是一種常見的心腦血管疾病。腦缺血損傷時(shí)常伴有細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子異常增加，而鈣離子濃度的異常增加被認(rèn)為是腦缺血損傷的重要機(jī)制。 由于 FKBP12.6 在細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡中具有重要作用， 因此推測 FKBP12.6在腦缺血中有重要作用。CDC42 即細(xì)

4、胞分裂周期蛋白 42，在細(xì)胞中主要參與細(xì)胞骨架蛋白的解聚，與細(xì)胞形態(tài)、遷移、分裂密切相關(guān)。有研究報(bào)道 Rip(RatInsulin-2 Promoter)-Cre 特異性敲除 CDC42 小鼠常伴有腦中一些核團(tuán)（主要是弓狀核）的非特異性敲除。弓狀核是攝食與能量代謝平衡的調(diào)節(jié)中樞，故 Rip-Cre特異性敲除 CDC42 小鼠的攝食可能發(fā)生變化。因此，本文旨在探究 FKBP12.6在腦缺血損傷中的作用及 CDC42 缺失對小鼠攝食的影響。

5、方法： 方法：中腦動(dòng)脈阻塞手術(shù)建模：缺血 60min 后將線栓拔出再灌，24h 后將腦切成 1mm 厚的腦片行 TTC 染色， 計(jì)算缺血區(qū)域面積評價(jià)神經(jīng)損傷。 FK506 給藥組缺血前 45min 腹腔注射 FK506，注射劑量為 10mg/kg，對照組注射 10ml/kg 的生理鹽水。培養(yǎng)胎鼠原代腦皮層細(xì)胞，9 天后氧糖剝奪（OGD）處理，處理時(shí)間分別為 1.5h、3h，對照組不做處理。繼續(xù)培養(yǎng) 24h 后，hoechest 染色顯示

6、凋亡細(xì)胞并計(jì)數(shù)以評價(jià)神經(jīng)損傷。 CDC42 條件性敲除小鼠和對照組禁食 24 小時(shí)后再給食，監(jiān)測 0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h 不同時(shí)間段內(nèi)的攝食量，一周后再監(jiān)測正常情況下每天的攝食量， 連續(xù)監(jiān)測一周。 腦部冠狀面冰凍切片 HE 染色觀察神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)和腦部結(jié)構(gòu)變化，分析 Rip-Cre 特異性敲除 CDC42 對攝食的影響。結(jié)果： 結(jié)果：1. 動(dòng)物水平結(jié)果顯示敲除小鼠 FKBP12.6 基因?qū)δX缺血損傷沒有明顯影響