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1、胰島素可抵抗M P P 十 誘導(dǎo)的P C 1 2 細(xì)胞的凋亡及其機制研究胰島 素可 抵抗 m p p + 誘導(dǎo)的P C 1 2 細(xì)胞的 凋亡及其機制研究中 文 摘 要帕金森氏 病 ( P a r k i n s o n d i s e a s e P D )是神經(jīng)系統(tǒng)常見的 變行性疾病之一。主要的病理改變是黑質(zhì)紋狀體通路的多巴 胺能神經(jīng)元變性,導(dǎo)致多巴 胺合成減少和乙 酞膽堿系統(tǒng)功能亢進(jìn)。 原發(fā)性 P D 的病因與發(fā)病機制至今尚 不
2、明了。 P D 患者中存在后天獲得性細(xì)胞代謝紊亂的 現(xiàn)象, 提示胰島素及其信號傳導(dǎo)通路障礙。 本文旨 在通過M P P + 誘導(dǎo)P C 1 2 細(xì)胞凋 亡建立 體外P D 模型, 進(jìn)而闡明 胰島 素是否 可以 發(fā)揮其抗凋亡作用及探討此可能機制。第一部分 胰島 素可以 抵抗m p p + 誘導(dǎo)的P C 1 2 細(xì)胞的 凋亡應(yīng)用二甲 基唆哇二苯基四哇澳鹽 ( M T T ) 法, 觀察P C 1 2 細(xì)胞暴露于不同 濃度、不同時間M P P
3、 ' 及胰島 素預(yù)先干預(yù)后再暴露于M P P ' 后細(xì)胞生存率的改變。 提示P C 1 2細(xì)胞生存狀態(tài)與M W 的濃度和時間呈反向 變化趨勢; 胰島 素可以 有效保護(hù)3 0 0 u MM P P + 1 2 小時內(nèi) 對P C 1 2 細(xì)胞的毒性損傷。應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶 鏈?zhǔn)椒?應(yīng) ( R T - P C R ) 測定酪 氨酸羚化酶 ( T y r o s i n eh y d r o x y l a s e T
4、 H ) m R N A 的 改變, 再次 證明 上 述觀點。進(jìn)一步應(yīng)用 H O E C H S T 染色結(jié)合熒光顯微鏡技術(shù)及流式細(xì)胞計數(shù)法明確M P P + 及胰島 素是否存在對P C 1 2 細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)及/ 或抗凋亡作用, 結(jié)果充分證明 胰島素可以 抵抗M P P + 誘導(dǎo)的P C 1 2 細(xì)胞的凋亡。第二部分 胰島 素受體磷酸化增加可抵抗 1 p p + 誘導(dǎo)的 P C 1 2細(xì)胞的凋亡胰島素可抵抗M P P ' 誘
5、導(dǎo)的P C 1 2 細(xì)胞的凋亡及其機制研究表達(dá)水平無明顯變化。 胰島素受體自 身酪氨酸磷酸化抑制劑一一 H N M P A - A M 3 可以阻斷胰島素的 抗凋亡作用。 過表達(dá)胰島素受體的細(xì)胞株抗凋亡作用進(jìn)一步增加。胰島 素受 體自 身 酪氨酸 磷酸化 增加是 胰島 素抗 M P P + 誘導(dǎo)的P C 1 2 細(xì)胞凋亡的 關(guān)鍵。3 . P I - 3 - K 的 特異性阻斷劑一一 W o r t m a n n i n 可以 部分阻
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