津力達(dá)改善棕櫚酸誘導(dǎo)的肌細(xì)胞胰島素抵抗的機(jī)制.pdf

1、胰島素抵抗(IR)是代謝性疾病如肥胖、2型糖尿病(T2DM)、高脂血癥、高血壓以及冠心病等發(fā)病的共同病理基礎(chǔ)，是這些代謝性疾病發(fā)生、發(fā)展的原動(dòng)力。IR主要表現(xiàn)為胰島素對(duì)其靶組織的生理效應(yīng)降低。骨骼肌是人體的運(yùn)動(dòng)器官，是機(jī)體葡萄糖、脂質(zhì)攝取和利用的重要器官，是能量代謝的重要部位，因此，骨骼肌IR產(chǎn)生是人體IR形成的重要部位。研究表明脂質(zhì)沉積、氧化應(yīng)激、炎癥等多種因素可以導(dǎo)致IR的發(fā)生。
　　磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)是能量代

2、謝調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，對(duì)脂肪酸的氧化過(guò)程至關(guān)重要。它表達(dá)于各種代謝相關(guān)的組織中，其中包括骨骼肌。AMPK可以被多種刺激激活，進(jìn)而作用于下游分子，促進(jìn)脂肪酸進(jìn)入線粒體氧化。線粒體是細(xì)胞的動(dòng)力工廠，是脂肪酸氧化并最終釋放能量的場(chǎng)所。AMPK可以作用于PGC1α及NRF1等，從而調(diào)控線粒體的氧化磷酸化相關(guān)分子，調(diào)節(jié)生物合成，影響線粒體功能。
　　中成藥津力達(dá)是由人參、黃精、蒼術(shù)、苦參、麥冬等17味中藥制成的治療2型糖尿病的復(fù)方制劑。臨床研究

3、表明其可保護(hù)胰島β細(xì)胞，改善胰島素抵抗[1]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)津力達(dá)可明顯降低大鼠血清甘油三酯和低密度脂蛋白水平，增加胰島素敏感性[2，3]，但其具體分子機(jī)制尚不清楚，本研究將觀察津力達(dá)對(duì)L6肌細(xì)胞胰島素抵抗及脂質(zhì)沉積的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　目的:觀察津力達(dá)對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)的L6肌細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用，測(cè)定AMPK信號(hào)通路及線粒體功能相關(guān)分子的表達(dá)，探討其機(jī)制。
　　方法:復(fù)蘇L6成肌細(xì)胞，培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化為L(zhǎng)6肌細(xì)胞后，

4、將其隨機(jī)分為兩組:正常對(duì)照(Con)組和棕櫚酸(PA)組，棕櫚酸組采用含0.4mmol/L棕櫚酸的培養(yǎng)基孵育24h，建立胰島素抵抗細(xì)胞模型。再將棕櫚酸組隨機(jī)分為5個(gè)亞組:棕櫚酸組，津力達(dá)低（JLD-L）、中(JLD-M)、高(JLD-H)劑量組和吡格列酮(PIO)組。上述藥物干預(yù)48h后，采用葡萄糖氧化酶法分別測(cè)定各組細(xì)胞培養(yǎng)基中葡萄糖攝取率，評(píng)價(jià)細(xì)胞的胰島素敏感性;收集細(xì)胞測(cè)定甘油三酯，游離脂肪酸含量;Real-Time PCR檢測(cè)L

5、6肌細(xì)胞AMPK、ACC、GLUT4、CPT1、NRF1、COXⅣ、ACADM、PPARα、PPARγ和PGC-1α的mRNA表達(dá);Western Blot檢測(cè)L6肌細(xì)胞AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC、CPT1、GLUT4和PGC1α的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、L6肌細(xì)胞胰島素敏感性比較:棕櫚酸組細(xì)胞葡萄糖攝取率較正常對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，津力達(dá)各劑量組及吡格列酮干預(yù)后葡萄糖攝取率較棕櫚酸組顯著增

6、加（均P＜0.05）。
　　2、L6肌細(xì)胞脂質(zhì)含量的比較:棕櫚酸組甘油三酯及游離脂肪酸含量較正常對(duì)照組顯著增加（均P＜0.05），津力達(dá)各劑量組及吡格列酮干預(yù)后甘油三酯及游離脂肪酸含量較棕櫚酸組顯著降低（均P＜0.05）。
　　3、L6肌細(xì)胞AMPK通路信號(hào)分子的表達(dá):AMPK及ACC的mRNA及蛋白表達(dá)在各組之間沒(méi)有差異（均P＞0.05）。與正常對(duì)照組相比，棕櫚酸組P-AMPK及P-ACC的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（均P＜0.05

7、），與棕櫚酸組相比，津力達(dá)組及吡格列酮干預(yù)后P-AMPK及P-ACC的蛋白表達(dá)顯著上調(diào)（均P＜0.05）。與正常對(duì)照組相比，棕櫚酸組CPT1和GLUT4的mRNA及蛋白表達(dá)均顯著下調(diào)（均P＜0.05）;與棕櫚酸組相比，津力達(dá)各劑量組及吡格列酮干預(yù)后CPT1及GLUT4的mRNA及蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)（均P＜0.05）。
　　4、L6肌細(xì)胞線粒體功能相關(guān)分子的基因及蛋白表達(dá):棕櫚酸組PGC-1α、NRF1、PPARα、PPARγ、CO

8、XⅣ及ACADM的mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)，津力達(dá)各劑量組及吡格列酮組顯著上調(diào)了PGC-1α、PPARα、PPARγ及ACADM的mRNA表達(dá)（均P＜0.05）。津力達(dá)中劑量組顯著上調(diào)了COXIVmRNA的表達(dá)（均P＜0.05），而津力達(dá)低、高劑量組及吡格列酮組未能顯著上調(diào)COXIVmRNA的表達(dá)。此外，津力達(dá)各劑量組及吡格列酮組均未上調(diào)NRF1mRNA的表達(dá)。PGC-1α蛋白表達(dá)同基因表達(dá)一致，在棕櫚酸組其表達(dá)顯著下調(diào)（均

9、P＜0.05），上述藥物干預(yù)后其表達(dá)顯著上調(diào)(均P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、棕櫚酸孵育可以誘導(dǎo)L6肌細(xì)胞胰島素抵抗，津力達(dá)干預(yù)可以改善L6肌細(xì)胞的胰島素抵抗程度，而且這種作用與胰島素增敏劑吡格列酮相當(dāng)。
　　2、津力達(dá)逆轉(zhuǎn)了棕櫚酸孵育導(dǎo)致的L6肌細(xì)胞AMPK信號(hào)通路及線粒體功能相關(guān)分子表達(dá)的下降，改善了細(xì)胞的脂質(zhì)沉積。
　　3、津力達(dá)能夠通過(guò)激活A(yù)MPK，改善線粒體功能，增加脂肪酸氧化，促進(jìn)葡萄糖的攝取