棉花gossypiumhirsutuml.ghmap1lc3基因的表達特征與抗血清的制備

1、分類號密級單位代碼：1 0 0 1 9學 號：S 0 2 0 2 4飛蛾差遺夭等碩士學位論文棉花( G o s s y p i u r nh i r s u t u mL _ ) G h M A P I - L 0 3 基因的表達特征與抗血清的制備E x p r e s s i o nC h a r a c t e r i z a t i o na n d A n t i s e r u m P r e p a r a t i o n

2、o fC o t t o n ( G o s s y p i u m h i r s u t u mL ．) G h M A P l - L C 3 G e n e研 究 生： 何心堯指 導 教 師： 楊佑明副教授合作指導教師： 劉國琴教授申請學位類荊：專業(yè)領域名稱：巫堂亟±作物栽培學與耕作學研 究 力 | 叫： 棉纖維發(fā)育分子機理所 在 學 院： 農(nóng)學與生物技術學院二零零五年五月A b s t r a c tC o t t

3、o n ( G o s s y p i u m h i r s u t u mL ) G h M A P l - L C 3 9 e n e w a sc l o n e di no u rl a b o r a t o r yp r e v i o u s l y ．A m i n oa c i d s e q u e n c e o f t h e g e n e i s i d e n t i c t o t h e c o n

4、s e r v a t i o n r e g i o n o f t h e l i g h t c h a i n 3 ( L C 3 ) o fm i c r o t u b u l e —a s s o c i a t e dp r o t e i nJ A ( M A P l A ) a n d1 B ( M A P l B ) ．S oi ts e e m st h eg e n ei s t h ec o u n t e

5、r p a r to f M A P ／一L C 3 g e n ei nc o t t o n ．T h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fG h N A P I - L C 3 g e n ei nS h i y u a n3 2 1 ( G o s s y p i u mh i r s u t u m ．L 、w a sa n a l y z e db y r e

6、a l - t i m eq u a n t i t a t i v eP C R ( R Q —P C 酌a n d a n t i s e r u ma g a i n s tM A P l 一L C 3 w a sp r e p a r e d ．T h er e s u l t s w e r e a sf o l l o w s ：1 ．T h eC T A B ·P V P m e t h o dw a sa d

7、o p t e dt o e x t r a c tR N A o fc o t t o nt i s s u e sa n dh i g hq u a l i t yR N Aw a so b t a i n e d ．2 ．T h ee x p r e s s i o nc h a r a c t e r i s t i co fG h M A P l - L C 3 9 e n ei nc o t t o nt i s s u e

8、 sw a s c o m p a r e d b yR Q ．P C R ．T h e e x p r e s s i o no ft h eg e n ew a sn o t d e t e c t e di nh y p o c o t y l ，一3 D P Ao v u l e ，3 0 D P A f i b e ra n d3 5 D P A f i b e rw h i l e i tw a sd e t e c t e

9、 di nr a d i c l e ，l e a f , p e t a l ，a n t h e r , O D P Ao v u l e ，5 D P A o v u l e ，I O D P A f i b e r , 1 5 D P A f i b e r ,2 0 D P A f i b e r a n d2 5 D P A f i b e r , t h eh i g h e s te x p r e s s i o nd

10、 e t e c t e dw a s i n2 0 D P A f i b e r ．3 ．T h eC - T A B - P V P m e t h o d w a sa d o p t e dt oe x t r a c tg e n o m eD N A o fc o t t o nl e a f , p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nw a s f o l l o w e

11、d b yg e n e —s p e c i f i cp r i m e r ．T h eP C R p r o d u c t o fg e n o m eD N A a n d2 0 D P A f i b e re D N A s h o w s i d e n t i cm o l e c u l a rw e i g h t ，s u g g e s t i n g t h ea b s e n to f i n t r

12、o ni n t h eg e n e ．4 ．H a v i n gi n c o r p o r a t e dt h eo p e n r e a d i n gf r a m eo ft h eg e n e i n t op E T 3 0 a v e c t o r , w e t r a n s f e r r e dt h er e c o m b i n e d v e c t o r i n t o J M l 0

13、9 p E 3 ) E c o l i S t r a i n ．A f t e r i n d u c i n g ，t h e e x p r e s s i o n p r o d u c t o fG h l d A P I - L C 3 9 e n e i s2 ％o f t o t a lp r o t e i no fi n d u c e dE c o l l ．5 ．P u r i f i e dp r o t e

14、i n w a so b t a i n e d b ya f f i n i t y c o l u m nc h r o m a t o g r a p h ya n dS D S - P A G Er e c o v e r ym e t h o d ．6 ．A n t i s e r u ma g a i n s tp u r i f i e dp r o t e i nw a sp r e p a r e db yi m m

15、u n i z a t i o n o fr a t sa n di t c a ns p e c i f i c a l l yr e c o g n i z eM A P l - L C 3 i nw e s t e r nb l o t t i n g ．K e y w o r d s ：C o t t o nf i b e r , M i c r o t u b u l e - a s s o c i a t e dP r o