假單胞菌屬no.2120產(chǎn)d甘露糖異構(gòu)酶的研究

1、江南大學(xué)碩士學(xué)位論文假單胞菌屬No.2120產(chǎn)D-甘露糖異構(gòu)酶的研究姓名：張荊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：制糖工程指導(dǎo)教師：童群義20091201A b s t r a c tA b s t r a c tS t u d y o n D —m a n n o s ei s o m e r a s e p r o d u c e db y P e s u d o m o n a s s p ．N o ．2 12 0S u b j e c t

2、& M a j o r ：E n g e e r i n g & S u g a r p r o d u c i n g p r o j e c tN a m e o f M a s t e r C a n d i d a t e ：Z h a n g J i n gS u p e r v i s o r ：P r o ．T o n g q u n y iI nt h i s s t u d y , t h ep a r

3、 e n t a l s t r a i n P s e u d o m o n a sS P ．w a su l t r a v i o l e t m u t a t e d ．A f t e rt w or o u n d sm u t a g e n e s i s ，t w os t r a i n s ( N o ．2 12 0a n d N o ．2 13 7 ) o b t a i n e d w e r e b e s

4、 ts t r a i n s 嘶m h i 曲e n z y m e a c t i v i t y ．B u t t h e r e s u l tp r o v e d t h a tN o ．2 12 0 h a d s t e a d y t r a n s m i s s i b i l i t y ．n e a c t i v i t yo f D —m a n n o s ei s o m e r a s e w a s

5、 d e t e m i n e db yt h ei m p r o v e dm e t h o db a s e d o nt h ec y s t e i n e - c a r b a z o l et e s ti n t r o d u c e db yD i s c h e ．W eh a v ei m p r o v e di t f o rc o l o rt e s tt i m e ，c o l o rt e s

6、 t t e m p e r a t u r e ，s t a b i l i t y , t h e e f f e c t i v et i m eo fc y s t e i nh y d r o c h l o r i c d e ，t h ee f f e c t i v ec o n c e n t r a t i o no f r e a c t i o np r o d u c t s ．A s i m p l ea n

7、 d c o n v e n i e n t ，r e l i a b l em e t h o dw a s s e tu p 、Ⅳi t l lg o o dr e p r o d u c t i o n , r e c o v e r y r a t ea n d t h el i m i t o f d e t e r m i n a t i o n b y i m p r o v i n gc y s t e i n e &#

8、183;·c a r b ·-a z o l e t e s t ．n e c o n d i t i o no f f l a s k f e r m e n t i o nw a s d e t e r m i n e d ：i n i t i a lp H7 ．0 ，t e m p e r a t u r e 3 0 “ C ，m e d i u mv o l u m e 5 0 m L o f p e r 2

9、 5 0 m L s h a k i n g f l a s k ，t h es p e e d o f r o t a r ys h a k e r 2 0 0 r ／m i n ，s e e dv o l u m e 4 ％．I no r d e r t oi n c r e a s et h ep r o d u c t i o no f D - m a n n o s e i s o m e r a s e ，t h ec u

10、l t u r em e d i u m o f P e —s u d o m o n a s s p ．N o ．2 12 0w a so p t i m i z e dt h r o u g hs i n g l e - f a c t o r ，P l a c k e t t - B u r m a nd e s i g na n dR e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g y

11、 ：f r u c t o s e1 ．5 3 ％，c o r ns t e e pp o w d e r2 ％，y e a s te x t r a c tO ．2 ％，K 2 H P 0 4 0 ．2 ％，M g S 0 4 ‘7 H 2 0O ．0 5 ％，N a C l0 ．0 5 ％，T w e e n - 8 0 0 ．15 ％．T h e y i e l do f D - m f l n n o s ei s o m e

12、r o s e c o u l d r e a c h e d 6 8 ．2 8 U ／m Lu n d e r t h eo p t i m a lc o n d i t i o n ．I nt h i sp a p e r ，u l t r a s o n i cw a v e W a s u s e d t od i s r u p t t h ec e l lo f P s e u d o m o n a s S P ．N o

13、．2 12 0 ．A f t e r s i n g l e —f a c t o r e x p e r i m e n t a n d o r t h o g o n a l e x p e r i m e n t , t h e o p t i m u m d i s c r u p t i o nc o n d i t i o n s ：o u t p u tp o w e r4 5 0 W , e a c h d u r a

14、t i o n o f r a d i a t i o n t i m e5 s ( w i t ha 5 si n t e r v a l ) ，t o t a lw o r k i n g t i m e5 ．5 m i n ，t h ea m o u n to f p h o s p h a t e b u f f e rp e r g r a mc e l l s 5 m l ／g ．D —- m a n n o s ew a

15、s i s o m e r i z e df r o mD - - f r u c t o s eu s i n gD ·- m a n n o s ei s o m e r o s e i n f o u rf o r m s ：p H o f b u f f e rW a s 7 ．5 ，t e m p e r a t u r ea n d t i m eo f r e a c t i o nw e r e 5 5 ℃a

16、n d 3 2 h ，r e s p e c t i v i l y ．B u tt h e r e a c t i o n p r o g r e s s e d s t e a d i l y w i t h o u t s i g n i f i c a n t i n h i b i t i o n a t i n c r e a s i n g s u b s t r a t ec o n c e n t r a t i o