銅綠假單胞菌產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶的臨床調(diào)查研究.pdf

1、銅綠假單胞菌對(duì)多種抗生素表現(xiàn)天然耐藥，由于該菌能高效獲取并傳遞外來(lái)DNA片段(如質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、整合子等)所攜帶的遺傳信息．導(dǎo)致了其耐藥機(jī)制極其復(fù)雜。近年來(lái)銅綠假單胞菌對(duì)多種抗生素的耐藥率在不斷增加，已經(jīng)出現(xiàn)一部分對(duì)三代頭孢菌素(如頭孢他啶)和亞胺培南耐藥的菌株。對(duì)于臨床分離的銅綠假單胞菌，其產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌的檢測(cè)方法，至今臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所尚無(wú)推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法。 目的： 研究金屬β-內(nèi)酰胺酶在銅綠假單胞菌

2、中的存在情況，探討產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌的檢測(cè)方法及耐藥機(jī)制。分析臨床中分離的同時(shí)耐亞胺培南和頭孢他啶銅綠假單胞菌的同源性，為合理應(yīng)用抗生素及臨床微生物實(shí)驗(yàn)室監(jiān)控金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法提供理論基礎(chǔ)。 方法： 用法國(guó)生物梅里埃公司ATB Expression細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)ID32GN鑒定板條檢測(cè)煙臺(tái)、淄博兩地區(qū)2004年1月-2006年11月期間的分離銅綠假單胞菌，采用K-B法篩選對(duì)亞胺培南和頭孢他啶同時(shí)

3、耐藥菌株作為測(cè)試菌株。采用EDTA紙片復(fù)合法和E-test法分別檢測(cè)測(cè)試菌株是否存在產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株，同時(shí)用PCR法檢測(cè)blaIMP-1和blaVIM-2耐藥基因進(jìn)行確證：重復(fù)序列引物聚合鏈反應(yīng)(ERIC-PCR)對(duì)測(cè)試菌株進(jìn)行基因分型。采用微量稀釋法測(cè)定產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株對(duì)8種常用抗菌藥物的的最低抑菌濃度(MIC)，分別是亞胺培南，頭孢他啶，頭孢哌酮，慶大霉素，阿米卡星，環(huán)丙沙星，氨曲南，左氧氟沙星。 結(jié)果：

4、 共分離銅綠假單胞菌302株，無(wú)重復(fù)分離株，篩選出34株作為試驗(yàn)菌株。采用EDTA紙片復(fù)合法篩選金屬β-內(nèi)酰胺酶，與E-test法和PCR法結(jié)果相比顯示，EDTA紙片復(fù)合法可用于初篩產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株。本研究結(jié)果為：EDTA紙片復(fù)合法篩選15株產(chǎn)金屬酶菌株：E-test法篩選11株產(chǎn)金屬酶菌株；用PCR法檢測(cè)3株blaIMP-1和5株blaVIM-2耐藥基因。采用微量稀釋法檢測(cè)產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌對(duì)8種抗菌藥物的最低抑菌濃

5、度(MIC)，結(jié)果顯示產(chǎn)金屬酶菌株呈多重耐藥，尤其是PCR法產(chǎn)金屬酶菌株耐藥呈現(xiàn)為高水平耐藥：阿米卡星抗菌活性最好(60.0％)，其次為環(huán)丙沙星(33.3％)。ERIC-PCR法對(duì)測(cè)試菌株進(jìn)行基因分型顯示，主要分為7型，存在散在的克隆菌株。 結(jié)論： (1)臨床分離的銅綠假單胞菌株中存在產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶菌株。 (2)EDTA紙片復(fù)合法方法簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠，可作為臨床微生物室初篩產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶銅綠假單胞菌的方法；