pcdna3.0sv40t重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在鵝小腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文pcDNA3.0-SV40T重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在鵝小腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)姓名：李融申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師：趙國(guó)琦20091201本試驗(yàn)設(shè)計(jì)并構(gòu)建含有S V 4 0 T 基因的重組表達(dá)質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ．S V 4 0 T ，為小腸上皮細(xì)胞永生化研究提供穩(wěn)定、可靠的分子工具。通過(guò)將質(zhì)粒p G E M ．S V 4 0 T 進(jìn)行X h o I 單酶切獲得S V 4 0 T 基因片

2、段，并將其插入真核表達(dá)質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 中，用分子克隆技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ．S V 4 0 T 。經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序證實(shí)，S V 4 0 T基因片段已經(jīng)成功地正向插入質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 中，重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ．S V 4 0 T 構(gòu)建成功。本試驗(yàn)采用脂顧體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將含有S V 4 0 T 基因的重組表達(dá)質(zhì)粒p c D N A 3 ：0 ：S V 4 0 T 導(dǎo)入

3、經(jīng)純化的鵝小腸上皮細(xì)胞稠過(guò)基因組D N 和檢測(cè)S V 4 0 T 基因在鵝小腸上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況。根據(jù)設(shè)計(jì)的不．A 同P 引C 物R RT擴(kuò)-P增CR序-一ysJ ，基因組D N A P C R 和R T - P C R 產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分別擴(kuò)增出4 2 9 b p 和2 2 5 b p 的特異性條帶，表明S V 4 0 T 基因在鵝小腸上皮細(xì)胞中成功表達(dá)。從而，重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．0 ：：S V 4 0 T 為進(jìn)一