蜂毒素對胃癌細胞系SGC-7901細胞的抑制作用及與細胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的：研究蜂毒素對人胃癌細胞株SGC-7901細胞增殖及凋亡的影響并探討其作用機制，為蜂毒素用于臨床方防治癌癥提供可靠的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　 方法：使用不同濃度（1、2、4、8、16和32 μg/mL）蜂毒素處理SGC-7901細胞不同時間（12、24、36、48和72h）后：（1）采用MTT法測定腫瘤細胞生長抑制率；（2）光鏡下觀察藥物處理后細胞形態(tài)變化；（3）Hoechest33258 染色熒光顯微鏡下檢測細胞核的改變

2、；（4）透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)的改變；（5）瓊脂糖凝膠電泳觀察凋亡細胞特征性DNA 條帶；（6）流式細胞儀法檢測細胞凋亡和細胞周期；（7）免疫組化觀察Bcl-2基因和Bax基因表達情況；（8）RT-PCR 檢測Bcl-2、Bax、P53、DR4、DR5mRNA的表達。
　　 結(jié)果：（1）蜂毒素對胃癌SGC-7901細胞的生長抑制作用隨著蜂毒素作用時間的延長和濃度的增加而明顯增強，蜂毒素作用48h 后，其IC50 為2.43 μ

3、g/mL，與對照組比較有顯著性差異（P<0.05）; （2）光鏡下觀察細胞數(shù)目減少，變小變圓，失去貼壁生長特性；（3）在熒光顯微鏡下觀察到8 μg/mL 蜂毒素組作用48h 后，細胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變:細胞核染色質(zhì)聚集、碎裂,細胞質(zhì)濃縮（4）透射電鏡觀察顯示蜂毒素組細胞呈凋亡表現(xiàn)，核固縮、碎裂，染色質(zhì)濃縮，邊集;（5）蜂毒素(4、8 μg/mL)組培養(yǎng)48 小時后DNA 瓊脂糖凝膠電泳可見典型的梯狀條帶，而對照組細胞DNA未見梯狀

4、條帶；（6）流式細胞DNA直方圖上出現(xiàn)典型的亞二倍體“凋亡峰”，2、4、8 μg/mL濃度蜂毒素作用人胃癌細胞后的細胞凋亡率分別為5.69±0.74％、10.58±1.32％、29.57±1.58％。（7）免疫組化染色法顯示，隨著蜂毒素濃度的增大，SGC-7901細胞Bcl-2 陽性表達逐漸減弱，陽性表達率也逐漸降低，Bax 陽性表達逐漸增強，陽性表達率也逐漸增加，各組之間差異均有顯著性差異（P<0.05）（8）RT-PCR測定顯示Ba