標本處理(核酸純化)程序

1、1實驗室主題文件編號F07第1頁共4頁第1版第0次修改臨滄市第二人民醫(yī)院檢驗科分子生物實驗室標本處理（核酸純標本處理（核酸純化）標準操作程序化）標準操作程序撰寫日期：2015.11.201目的：保證標本處理標準化、規(guī)范化，使不規(guī)范操作因素對實驗結(jié)果造成的影響減至最小。2適用范圍：乙型肝炎病毒核酸提取、解尿支原體核酸提取、沙眼衣原體核酸提取、HPV核酸提取、HCV核酸提取、結(jié)核桿菌核酸提取、淋球菌核酸提取。3操作人：李成庭、李麗蒙、高子文

2、李華嬌張國華4標準操作程序4.1乙型肝炎病毒（DNA血清）1）雙手戴上手套，從冰箱取出標本，將離心管依次編號。2）取出1.5ml離心管，對應標本編號，置于離心管架上。3）將移液器調(diào)到70l，先混勻DNA提取液，再吸取70l加入到已編號的離心管中。然后吸取30l血清，加入離心管中混勻，注意每吸取一份血清標本應更換一次槍頭。處理全部標本，然后將離心管插到金屬浴孔內(nèi)，100℃加熱10分鐘。4）裂解完成后將離心管取出，然后10000rpm離心5

3、分鐘，取上清液20l加樣上機。5）收拾臺面至準備狀態(tài)。4.2CT、UU、NGHDNA（分泌物）1）雙手戴上手套，從冰箱取出標本，將化驗單和離心管依次編號。2）雙手換上新手套，取出1.5ml滅菌離心管，對應標本編號，置于34.4丙型肝炎病毒RNA（血清）1)雙手戴上手套，從冰箱取出標本，將離心管依次編號。2）取出1.5ml滅菌離心管，對應標本編號，置于離心管架上.3)1.5ml無菌管加入50ul蛋白酶K→200ul血清→200ul裂解液混

4、勻72℃加熱10min（同時將洗脫液72℃預熱）→加入250ul無水乙醇→將混合液全部吸至離心柱12000rpm1min→將離心柱裝在新的收集管中→加500ul抑制物去除液12000rpm1min→將離心柱裝在新的收集管中→加500ul去離子液12000rpm1min→將離心柱裝在新的收集管中→再加500ul去離子液12000rpm4min→將離心柱裝在1.5ml的離心管中，開蓋72℃2min→在離心柱正上方加入72℃預熱的洗脫液35u

5、l蓋蓋14000rpm1min離心管內(nèi)即病毒核酸溶液，最好立即使用，如需保存，置20℃。注：配試劑蛋白酶K1.375ml洗脫液，混勻，20℃保存CarrierRNA110ul內(nèi)標液混勻，20℃保存去離子濃縮液44ml無水乙醇裂解工作液:1人份病毒裂解液200ulCarrierRNA4ul現(xiàn)用現(xiàn)配（根據(jù)標本數(shù)依次增加）。PCR試劑HCV反應液A2ulHCV反應液B3ulHCV反應液C25ul混勻（根據(jù)標本數(shù)依次增加）。4.5乳頭瘤病毒DN