常見微生物標本的采集

1、常見微生物標本的采集、處理與檢測常見微生物標本的采集、處理與檢測標本采集的基本原則：盡早采集、根據可疑的病原體，選擇不同采集時機和標本種類、在抗生素應用前采集、遵守無菌操作、正確保存和運送。容器應密封不易碎，標本不得污染容器的口和外壁。1.1.血液標本血液標本正常人的血液是無菌的。當細菌侵入時可引起嚴重的菌血癥或敗血癥。一般情況下在患者發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時采集；持續(xù)性菌血癥可隨時采集；間歇性菌血癥，應預測其體溫上升期進行采血。一般在使用

2、抗生素前采集2~3次；多部位采集，如兩側肘靜脈或動、靜脈同時采取；對于已使用抗生素而無法停止的患者，也應在下次用藥前采取。在感染局部的附近血管中采血，可提高陽性率。采血量成人一般5~10ml，嬰幼兒1~2ml。采集的血液標本注入培養(yǎng)瓶中先進行增菌培養(yǎng)，培養(yǎng)基和血液標本量的比例應10：1，將血液中的各類殺（抑）菌物質充分稀釋。需氧菌常用培養(yǎng)基有胰酪蛋白大豆胨肉湯和葡萄糖酚紅肉湯等，常加入對氨基苯甲酸（PABA）50μgml中和磺胺類，青霉

3、素酶2單位ml破壞青霉素類，硫酸鎂中和鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸鈉（sodiumpolyaholsulfonateSPS）可抑制血清中的抗菌物質，并對氨基糖苷類和多肽類抗生素有滅活效果。并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生長因子。培養(yǎng)瓶每天觀察一次。如發(fā)現①培養(yǎng)瓶內液體渾濁；②血球層上面出現顆粒狀的生長物，并且有自下而上的溶血；③有明顯的凝塊；④液體表面有菌膜，培養(yǎng)液清晰或渾濁等，表明

4、有細菌生長。直接進行涂片染色初步報告。同時分別接種血平板、巧克力（色）平板，普通培養(yǎng)和5%CO235℃培養(yǎng)。也可直接進行體外藥敏試驗。無細菌生長跡象的培養(yǎng)瓶孵育至第7d，接種血平板、巧克力（色）平板，分別進行普通培養(yǎng)和5%CO2環(huán)境35℃孵育24h。為了提高檢出的速度，在培養(yǎng)的第2~3d時應移種一次。有厭氧菌感染時，同時注入需氧瓶和厭氧瓶，厭氧培養(yǎng)基通常用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、牛心腦浸液肉湯等；培養(yǎng)液中有刃天青，無氧時無色，有氧時呈紅色。需

5、氧瓶和厭氧瓶同時渾濁，或需氧瓶無生長而厭氧瓶液體渾濁，提示厭氧菌生長。分別接種血平板和厭氧血平板，置需氧和厭氧環(huán)境中，如果都只生長1種細菌，則為兼性厭氧菌；如果僅在厭氧環(huán)境中生長，可以直接報告“有厭氧菌檢出”。若長期應用抗細胞壁類抗生素，應考慮細菌L型存在，將血液接種高滲培養(yǎng)基中，分別進行需氧、厭氧和5%CO2環(huán)境培養(yǎng)。每周移種2~3次于高滲固體培養(yǎng)基上，觀察有無細菌L型菌落生長。2.2.呼吸道標本呼吸道標本正常上呼吸道有正常菌群。下呼

6、吸道正常情況下無細菌或僅有少量細菌侵入腦脊液標本的采集以無菌手續(xù)通過腰椎穿刺采集腦脊液3~5ml，應立即送檢或床邊接種。應在35℃保溫運送。直接涂片檢查由細菌引起的化膿性腦膜炎一般呈現混濁，在抗生素治療后亦可不混濁。此外結核性腦膜炎、無菌性腦膜炎等也不混濁。可直接涂片革蘭染色檢查，不混濁的可3000rmin離心10~15min后取沉淀涂片染色檢查。如發(fā)現革蘭陰性、凹面相對的雙球菌，位于中性白細胞內外，則可報告“找到革蘭陰性雙球菌，位于細

7、胞內（外），疑似腦膜炎奈瑟菌”；有革蘭陽性矛頭狀的雙球菌，菌體周圍有明顯的莢膜，可報告“找到革蘭陽性雙球菌，疑似肺炎鏈球菌”。用肺炎鏈球菌全價抗血清進行莢膜腫脹試驗，陽性者可報告“莢膜腫脹試驗檢出肺炎鏈球菌”；發(fā)現其他形態(tài)的細菌，可根據形態(tài)和染色性進行報告。涂片陽性的標本最好進行標本的直接藥敏試驗。應立即接種在35℃預保溫的血平板和巧克力平板上置5~10%CO2環(huán)境35℃培養(yǎng)18~24h。腦脊液標本一般經3d培養(yǎng)仍未見細菌生長，可報告“

8、經3天培養(yǎng)無細菌生長”。腦脊液標本特殊病原菌的檢驗結核分枝桿菌將腦脊液4000rmin離心30min，取沉淀抗酸染色；或將腦脊液在室溫下靜置18~24h，待形成纖維網后，傾倒在潔凈玻片上抗酸染色?；蛴媒鸢贰癘”進行熒光染色觀察。取沉淀接種羅瓊培養(yǎng)基進行結核分枝桿菌的培養(yǎng)。新型隱球菌將腦脊液離心沉淀后，進行墨汁負染，可在黑色背景中觀察到折光性很強的菌體和周圍似暈輪樣的透明莢膜，有時可見到生芽的新型隱球菌。5.5.糞便標本的采集糞便標本的采

9、集糞便標本于急性腹瀉期及未使用抗生素之前采取自然排出的糞便，挑選粘液、膿血部分，置無菌容器、保存液或增菌培養(yǎng)基中?？捎酶亻T拭子。不能立即送檢的標本應放入CaryBlair運送培養(yǎng)基中。（1）直接涂片檢查臨床懷疑是霍亂弧菌、結核分枝桿菌感染或菌群失調需要大致估計菌群比例、二重感染（偽膜性腸炎、真菌性或葡萄球菌性腸炎）時進行直接涂片染色檢查?；魜y弧菌的涂片檢查取“米泔水”樣糞便或肛門拭子涂片2張，干燥后用乙醇或甲醇固定，分別進行革蘭染色和1

10、：10稀釋石炭酸復紅染色，用油鏡觀察有無革蘭陰性、魚群樣排列的弧菌。另外也可進行懸滴法動力試驗和制動試驗。菌群失調及菌交替癥取糞便標本直接涂片，進行革蘭染色油鏡觀察，根據菌群的形態(tài)和染色特征可大致描述菌群的情況。疑為偽膜性腸炎的患者標本中如發(fā)現大量革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌，則可報告“找到革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌”；如發(fā)現革蘭陽性粗大桿菌、無莢膜，通常有位于菌體一端的卵圓形芽胞者，可報告“找到革蘭陽性芽胞桿菌，疑似艱難梭菌”。結核分枝