實驗八 果蔬中維生素c的提取和定量測定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

1、1實驗八實驗八果蔬中維生素果蔬中維生素C的提取和定量測定（的提取和定量測定（26二氯酚靛酚滴定二氯酚靛酚滴定法）法）【原理原理】1.學習并掌握定量測定維生素C的原理和方法。2.了解蔬菜、水果中維生素C含量情況。維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺少它時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸（bicacid）。它對物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。近年來，發(fā)現(xiàn)它還有增強機體對腫瘤的抵抗力，并具有化學致癌物的阻斷作用。維生素C是不飽和多羥基物，

2、屬于水溶性維生素。它分布很廣，許多水果、蔬菜中的含量更為豐富。維生素C具有很強的還原性。還原型抗壞血酸能還原染料26二氯酚靛酚（DCIP），本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中，26二氯酚靛酚呈紅色，還原后變?yōu)闊o色。因此，當用此染料滴定含有維生素C的酸性溶液時，維生素C尚未全部被氧化前，則滴下的染料立即被還原成無色。一旦溶液中的維生素C已全部被氧化時，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。所以，當溶液從無色變成微紅色時即表示溶液中的維生素C剛剛

3、全部被氧化，此時即為滴定終點。如無其它雜質(zhì)干擾，樣品提取液所還原的標準染料量與樣品中所含還原型抗壞血酸量成正比。【試劑和器材試劑和器材】一、試劑一、試劑2%草酸溶液:草酸2g溶于100mL蒸餾水中。1%草酸溶液:草酸1g溶于100mL蒸餾水中。標準抗壞血酸溶液（1mgmL）:準確稱取100mg純抗壞血酸（應為潔白色，如變?yōu)辄S色則不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀釋至100mL，貯于棕色瓶中，冷藏。最好臨用前配制。0.1%26二氯酚靛酚溶液

4、:250mg26二氯酚靛酚溶于150mL含有52mgNaHCO3的熱水中，冷卻后加水稀釋至250mL，貯于棕色瓶中冷藏（4℃）約可保存一周。每次臨用時，以標準抗壞血酸溶液標定。二、材料：二、材料：水果、蔬菜三、器材三、器材研缽，組織勻漿器，吸量管，抽濾設備，離心機，濾紙，容量瓶，滴定管，錐形瓶?！静僮鞣椒ú僮鞣椒ā?【思考題思考題】1為了測得準確的維生素C含量，實驗過程中都應注意哪些操作步驟？為什么？2試簡述維生素C的生理意義?！拘≠Y料

5、小資料】一、維生素一、維生素C維生素C是人類膳食中必需的維生素之一，如果缺乏維生素C，將導致壞血病發(fā)生。因此，維生素C又稱為抗壞血酸，有防治壞血病的功效?？箟难嵩谧匀唤绶植际謴V泛，存在于新鮮水果和蔬菜中，尤其是檸檬果實和一些綠色植物（如青辣椒、菠菜等）中含量特別豐富?？箟难嵩跈C體同具有廣泛的生理功能，已知體內(nèi)許多重要物質(zhì)的代謝反應都需要抗壞血酸的參與。它是脯氨酸羥基化酶的輔酶，故有增進膠原蛋白合成的作用。機體中許多含疏基的酶，需要

6、依賴于作為還原劑的抗壞血酸的保護，使酶分子的疏基處于還原狀態(tài)，從而維持其催化活性。由于抗壞血酸的氧化還原作用，它可促進免疫球蛋白的合成，增強機體的抵抗力。同時還能使氧化型谷胱甘肽轉化為還原型谷胱甘肽（簡稱GSH），而GSH可與重金屬結合而排出體外，因此維生素C常用于重金屬的解毒。此外，抗壞血酸尚有許多其他生理功能，但其作用機理還不十分清楚?？箟难崾且环N不飽和的多羥基內(nèi)酯化合物，稍有酸味的糖類白色晶體，易溶于水，故屬于水溶性維生素。在溶

7、液中其分子內(nèi)C2和C3之間的烯醇式羥基上的氫極易解離并釋放出H，而被氧化成脫氫抗壞血酸，氧化后仍具有維生素C的生理活性，但它易分解為二酮古洛糖酸，此化合物不再具有維生素C的生理活性。維生素C有很強的還原性，在堿性溶液中加熱并有氧化劑存在時，易被氧化而破壞。還原型和氧化型抗壞血酸可以互相轉變，在生物組織中自成一氧化還原系統(tǒng)。由于維生素在營養(yǎng)學和臨床方面的重要意義，故對食物和生物材料中維生素含量的測定是十分必須的?？箟难岬亩繙y定方法很多

8、，有26—二氯酚靛酚（簡稱DCIP）滴定法、碘滴定法、24—二硝基苯肼法、Folin試劑比色法、紫外吸收法等。其中廣泛采用的是DCIP滴定法，它具有簡便、快速、比較準確等優(yōu)點，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類物質(zhì)，將給滴定終點的觀察造成困難。在酸性環(huán)境中，抗壞血酸（還原型）能將染料26—DCIP還原成無色的還原型26—DCIP，而抗壞血

9、酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型26—DCIP在中性或堿性溶液中呈藍色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當用26—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的26—DCIP立即被還原成無色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時，則滴下微量過剩的26—DCIP便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時即為滴定終點，表示溶液中的抗壞血酸剛剛全部被氧化。依據(jù)滴定時26—DCIP標準溶液的消耗量(ml)，可以計算出被測樣品中抗

10、壞血酸的含量。氧化型26—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進行反應。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后，再用26—DCIP標準溶液滴定至終點。食物和生物材料中常含有其他還原物質(zhì)，其中有些還原物質(zhì)可使26—DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質(zhì)對定量測定的干擾，可用抗壞血酸氧化酶處理，破壞樣品中還原型抗壞血酸后，再用26—DCIP滴定樣品中其他還原物質(zhì)。然后從滴定未經(jīng)酶處理樣品時26—DCIP標準溶液的總消耗量中

11、，減去滴定非抗壞血酸還原物質(zhì)26—DCIP標準溶液的消耗量，即為滴定抗壞血酸實際所消耗的26—DCIP標準溶液的體積，由此可以計算出樣品中抗壞血酸的含量。另外，還可利用抗壞血酸和其他還原物質(zhì)與26—DCIP反應速度的差別，并通過控制樣品溶液在pH1—3范圍內(nèi)，進行快速滴定，可以消除或減少其他還原物質(zhì)的作用，一般在這樣的條件下，干擾物質(zhì)與26—DCIP的反應是很慢的或受到抑制。生物體液（如血液、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難，因為這些樣