反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法在食品維生素A和維生素E（α-生育酚）測定中的應(yīng)用.pdf

1、維生素A(Retinol)和維生素E(Tocopherol)是機(jī)體維持正常代謝和機(jī)能必需的脂溶性維生素。由于這兩種維生素在外界環(huán)境中不穩(wěn)定，易受光、氧等影響而被氧化破壞，影響因素較多，因此尋找合適的測定方法同時測定維生素A和E仍然是目前檢驗技術(shù)的難點。目前的國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法測定時間長、方法繁瑣，可能導(dǎo)致樣品中脂溶性維生素?fù)p失，回收率也不高。本文建立了一種快速、靈敏、準(zhǔn)確的反相高效液相色譜法同時測定食品中維生素A(retinol)和α-生

2、育酚(α-tocopherol)的方法，樣品處理簡單，方法簡便易行，并用建立的方法對鞍山地區(qū)市售嬰幼兒食品及保健食品中維生素A和E進(jìn)行了測定，取得較好的結(jié)果。 材料與方法: 一、材料 (一)主要儀器和試劑美國安捷侖1100高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器；色譜柱：Supelco C 18柱，15cm×2．1mm，5 μm(美國安捷侖公司)；超聲波清洗器；N-EVAP TM 112氮氣吹掃儀；LXJ Ⅱ型離心沉淀機(jī)

3、，0～4000r/min；0/45 μm有機(jī)系針筒式微孔濾膜過濾器；超純水系統(tǒng)(中國北京)；維生素A和α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)品，含量>99.0％(美國sigma公司產(chǎn))。 (二)樣品來源隨機(jī)抽取鞍山地區(qū)市售嬰幼兒食品及保健食品。 二、方法 取一定量食品樣品加入無水乙醇、氫氧化鉀及焦性沒食子酸，80℃水浴皂化30min，經(jīng)石油醚提取，氮氣吹掃濃縮致干后用流動相溶解，進(jìn)樣5 μl分析；色譜條件：色譜柱Supelco C 18

4、柱(15cm×2.1mm，5μm)，流動相甲醇：水(93：7)，流速0.4ml/min，柱溫40℃，DAD掃描波長范圍210～370nm，檢測波長325nm(Vitamin A)和294nm(Vitamin E)。 實驗結(jié)果: 一、維生素A與維生素E檢測相關(guān)性研究 維生素A在1.0～100.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9998；維生素E在0.10～10.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=

5、0.9991。 二、維生素A與維生素E回收率實驗本方法維生素A和維生素回收率>96％，效果良好。 三、維生素A與維生素E精密度檢測取1份樣品進(jìn)行精密度試驗，重復(fù)測定5次，精密度較好。 四、反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法與國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法比較 稱取同一樣品(完達(dá)山乳粉)5份，分別用本法和國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法GB/T5009．82-2003測定，檢測結(jié)果無顯著性差異。 五、反相高效液相色譜-二極管陣列

6、檢測法對鞍山地區(qū)樣品評估 在鞍山市場抽取嬰幼兒食品及保健食品30份，分別用國家標(biāo)準(zhǔn)方法和本方法進(jìn)行測定，按照相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)和產(chǎn)品標(biāo)識判定，Va和Ve的合格率為100％。 討論: 一、色譜條件的選擇 分別應(yīng)用甲醇、甲醇：水、甲醇：乙酸：水以及不同濃度范圍NH<,4>Ac水溶液與甲醇按不同比例混合等幾種流動相，經(jīng)實驗證明，在甲醇：水(93：7)條件下，幾種脂溶性維生素之間，以及和樣品中干擾物能達(dá)到較好的基線分離

7、；在0.2ml/min～2.0ml/min范圍內(nèi)改變流動相流速，在流速為0.2ml/min～0/8ml/min幾種維生素出峰時間合適，峰形較好，干擾少；對幾種維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液用紫外光譜儀進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)維生素A在325nm、維生素E在294nm處有最大吸收峰，二極管陣列檢測器的紫外吸收光譜圖也證實了這個結(jié)果，為保證二極管陣列檢測器檢測波長范圍包含所需波長，我們確定波長掃描范圍在210～370nm之間；我們確定進(jìn)樣量為5 μ l，測定結(jié)果令人

8、滿意。 二、樣品前處理條件的選擇 通過比較幾種不同的皂化劑及不同濃度，最后我們選擇l：lKOH溶液20ml；溫度越高皂化效果越好，綜合考慮，我們采用80℃水浴，皂化30min以保證各種樣品能皂化完全。通過比較BHA、對苯二酚和焦性沒食子酸等幾種抗氧化劑，發(fā)現(xiàn)在皂化液中加入16g/L的焦性沒食子酸，可有效地保護(hù)脂溶性維生素不被破壞。 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍與最低檢測量 將混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣5 μl進(jìn)行測定

9、。用峰面積比對濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，維生素A在1.0～100.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9998；維生素E在0.10～10.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。以基線噪聲三倍峰面積對應(yīng)的維生素A和維生素E含量作為最低檢測限，測得維生素A最低檢測量為0.8ng；維生素E的最低檢測量為90.7ng。 四、回收率試驗與精密度試驗 取同一樣品4份，測定維生素A和維生素E回收率，在96％以上。取

10、1份樣品進(jìn)行精密度試驗，重復(fù)測定5次，精密度較好。 五、反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法與國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法比較 對照實驗顯示，反相高效液相色譜一二極管陣列檢測法與國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法GB/T5009．82-2003檢測結(jié)果無顯著性差異，本方法測定時間為2.5小時，檢驗成本119元，國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法測定時間為4小時，檢驗成本176元。由此可見，本方法省時，節(jié)約檢驗成本。 六、反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法對鞍山地