血型鑒定與交叉配血

1、血型鑒定與交叉配血,醫(yī)學檢驗系 陳麗華,一、ABO血型鑒定,鹽水凝集法玻片法試管法凝膠微柱法,檢測紅細胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判斷血型。 常規(guī)的方法包括正向定型與反向定型正向定型※：已知抗體特異性的血清檢查紅細胞抗原反向定型※：已知血型紅細胞檢查血清抗體,血型鑒定原理,,,＋表示凝集，－表示無凝集,對抗血清的要求※,①高度特異，只能與相應(yīng)的紅細胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集，②高

2、效價，抗A血清效價在1:128以上，抗B血清效價在1:64以上。③高親和力，15秒內(nèi)出現(xiàn)凝集，其強度為3分鐘時凝塊>1mm。④無冷凝集素。⑤無菌。分離血清后56℃，30min滅活。,ABO 血 型 鑒 定,1．生理鹽水凝集法,①ABO血型抗體一般是IgM，屬于完全抗體②IgM抗體分子鏈較長，能克服紅細胞表面排斥力，同時分子量較大，它能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，在生理鹽水中發(fā)生肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,ABO 血 型 鑒

3、 定,原理,IgM抗體凝集紅細胞示意圖,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,IgM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集,①玻片法：操作簡單，不需要離心，適于大規(guī)模血型普查。反應(yīng)時間長，易忽略較弱的凝集而導致定型錯誤。不適于反定型。,ABO 血 型 鑒 定,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,鏡檢證實,

4、ABO 血 型 鑒 定（玻片法）,抗A血清1滴,,抗B血清1滴,,,,加5％紅細胞懸液1滴，混勻,,,連續(xù)轉(zhuǎn)動玻片,1～5min,凝集,無凝集,,,,,抗A+B血清1滴,②試管法：需時間短，適用于急診定型?？烧炊ㄐ?。可發(fā)現(xiàn)亞型或較弱抗原抗體反應(yīng)，結(jié)果判斷可靠，為常規(guī)檢查方法。,ABO 血 型 鑒 定,正反定型結(jié)果不一致的解決辦法,①首先重復(fù)試驗，如果仍然不符繼續(xù)下列試驗。②重新采集新鮮血液標本，以糾正因污染或樣本錯

5、誤造成的不符合。③多次洗滌被測紅細胞和標準紅細胞，除去可能會影響試驗結(jié)果的血漿中或紅細胞保存試劑中的化學成分。④用抗A1、抗A+B檢測紅細胞。,ABO血型鑒定（鹽水法）注意事項,⑤如懷疑血清中有抗A1，可用數(shù)份A2紅細胞標本進行檢驗。⑥如果試驗結(jié)果未見凝集，應(yīng)將反應(yīng)管至少在室溫和40℃分別放置30min，用顯微鏡檢查。⑦若懷疑是由于抗原減弱造成的正反定型不符，可進一步做木瓜酶試驗、直接抗球蛋白試驗、吸收放散試驗等加以鑒別。,正反

6、定型結(jié)果不一致的解決辦法,ABO血型鑒定（鹽水法）注意事項,2．凝膠微柱法,凝膠具有分子篩效應(yīng)和親合效應(yīng)親合效應(yīng)：紅細胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合分子篩效應(yīng)：低速離心后，凝集紅細胞懸浮在凝膠中，而未被抗體結(jié)合的紅細胞則沉于凝膠底部（管底尖部）。結(jié)果觀察：肉眼/血型分析儀,ABO 血 型 鑒 定,操作標準化，結(jié)果特異、準確可靠，重復(fù)性好、靈敏度高?？墒止?、半自動及全自動操作不足之處：需要特殊試劑和離心機成本較高。,ABO 血

7、型鑒定（凝膠微柱法）,,,【原理】凝膠具有分子篩效應(yīng)和親合效應(yīng)，在微株凝膠介質(zhì)中紅細胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，凝集的紅細胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結(jié)合的紅細胞則沉于凝膠底部（管底尖部）※?！酒鞑摹课⒘课鼧訕專淮涡晕^，微柱凝膠卡專用水平離心機?！驹噭?特異性凝膠微柱卡,ABO 血型鑒定（凝膠微柱法）,【操作】（1）將被檢者紅細胞（不用洗滌）配成2％～3％生理鹽水懸液，向已標記好的特異性凝膠微柱卡的微管反應(yīng)腔內(nèi)加50μ

8、L.（2）立即水平離心1000r/min, 10min.（3）觀察及判斷血型結(jié)果①陽性：對照管細胞沉淀在管底，檢測管凝集塊在膠上或膠中。 ②陰性：對照管和檢測管細胞沉淀均在管底。 ③試驗失敗：對照管細胞在膠上或 膠中，應(yīng)重新做試驗。（4）報告方式：同生理鹽水法。,ABO 血型鑒定（凝膠微柱法）,注意事項,離心機選擇：一般使用微柱凝膠卡專用水平離心機。使凝集復(fù)合物不偏向一側(cè)，特別是陰性結(jié)果不偏向管底之一側(cè)，以免造成弱陽

9、性假象。操作：蔣待檢者的稀釋后的懸紅用微量加樣槍分別加在A.B.D和陰性對照孔各50ul離心：為了應(yīng)用不同離心半徑和不同離心機進行凝膠試驗，應(yīng)通過試驗設(shè)定每臺離心機的最佳時間和速度。,ABO 血型鑒定（凝膠微柱法）,,,ABO血型鑒定錯誤可以引起嚴重的后果。鑒定結(jié)果錯誤因素主要有技術(shù)問題及ABO血型本身的問題。,二、交叉配血,,交叉配血是在輸血前必須做的試驗。交叉配血中最重要的是ABO血型配合，必需ABO血型相同，且交叉配血無

10、凝集才能輸血。,（一）交叉配血的重要性,（二）交叉配血一些基本概念,概念：是檢查供血者與受血者是否含有不相合的抗原和抗體成分的試驗，主要是檢查受血者血清中有無破壞獻血者RBC的抗體。供血者紅細胞與受血者血清反應(yīng)（主側(cè)交叉配血※） 受血者紅細胞與供血者血清反應(yīng)（次側(cè)交叉配血※）,,獻血者 受血者紅細胞 紅細胞血清

11、 血清,,,主側(cè),次側(cè),交叉配血目的,①發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯誤。,②發(fā)現(xiàn)不規(guī)則凝集素。如冷凝集素。,③發(fā)現(xiàn)其他血型抗體和一些不規(guī)則抗體。,（三）交叉配血方法,1、室溫鹽水配血法（只能檢出IgM型血型抗體）2、聚凝胺法3、抗人球蛋白法4、蛋白酶法5、微柱凝膠法,方法選擇原則,①無輸血及妊娠史者，只需作鹽水配血?！?②有輸血史，婦女有原因不明的流產(chǎn)史及新生兒溶血病者，應(yīng)用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝胺介質(zhì)法。,

12、③有多發(fā)性骨髓瘤，進行性結(jié)核，肝損傷，輸過右旋糖酐的病人，為避免假陽性，作抗人球蛋白配血。,1、室溫鹽水配血法,【原理】天然IgM類血型抗體與對應(yīng)紅細胞在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細胞（主側(cè)）以及受血者紅細胞與供血者血清（次側(cè)）之間有無凝集的現(xiàn)象，判斷受血者與供血者之間有無ABO血型不合的現(xiàn)象。,交 叉 配 血,判斷配血是否相合※①ABO同型配血，主、次側(cè)均無溶血及凝集，血型相合，可以輸血

13、；主、次側(cè)任何一管發(fā)生溶血或凝集，不可輸血，應(yīng)查找原因。②異型配血時，主側(cè)無凝集無溶血，次側(cè)有凝集無溶血，可以輸少量血；如主側(cè)、次側(cè)均不凝集或主側(cè)凝集，不能輸血，需查找原因,交 叉 配 血（鹽水凝集法）,報告方式（1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx（X型）紅細胞 凝集與否及強弱程度（2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx（X型）紅細胞 凝集與否及強弱程度（3）受血者xxx與供血者xxx配血是否相合,交 叉 配

14、 血（鹽水凝集法）,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,主側(cè)配血管,次側(cè)配血管,DC1滴,PS1滴,,,PC1滴,DS1滴,,,1000r/min,離心1min,觀察上層液有無溶血,輕搖試管,肉眼觀察有無凝集,有凝集（復(fù)查）,無凝集,鏡檢證實,交叉配血鹽水介質(zhì)法操作示意圖,,【注意事項】,1.如果對患者的輸血史或妊辰史不明，必須使用48h內(nèi)的標本。2.不能使用溶血標本。3.配血后，受血者/供血者的全部標本須于2～6℃冰

15、箱保存7d以備復(fù)查。,交 叉 配 血（鹽水凝集法）,【方法學評價】,本法簡易、經(jīng)濟、快速，缺點是僅用于檢查ABO血型系統(tǒng)的IgM血型抗體是否相配，不能檢出不相配的IgG血型抗體。,交 叉 配 血（鹽水凝集法）,2、聚凝胺介質(zhì)配血法（MPT）※,【原理】：①聚凝胺是帶有高價陽離子的多聚季氨鹽，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細胞表面的負電荷，減少細胞間排斥力，縮小了其間之距離，出現(xiàn)非特異性凝集。②低離子強度溶液降低紅細胞的Zeta電位

16、，可進一步增加抗原抗體間的吸引力。③枸櫞酸鹽解聚液可消除聚凝胺的正電荷，使非特異性凝集消散，但IgM或IgG類血型抗體與紅細胞產(chǎn)生的特異性凝集不會散開。,,,,,主側(cè)配血管,次側(cè)配血管,Dc1滴,PS1滴,,,PC1滴,DS1滴,,,主側(cè)、次側(cè)配血管,凝集,不凝集：試劑無效,交叉配血凝聚胺介質(zhì)法操作示意圖,低離子溶液0.6ml,混勻,,,,,加凝聚胺2滴，混勻15s,,,棄去上清,1000r/min,離心1min,,加解聚液2滴,,鏡

17、檢判斷配血是否相合,1分鐘,,【方法學評價】,聚凝胺介質(zhì)法可加快凝集反應(yīng)速度，使原來在鹽水介質(zhì)中不能凝集紅細胞的抗體發(fā)生凝集，提高反應(yīng)靈敏度，能檢測IgM、 IgG等引起溶血反應(yīng)的幾乎所有規(guī)則與不規(guī)則抗體，適用于各類輸血患者的配血。故該法具有快速、靈敏、結(jié)果可靠、能撿出完全抗體及不完全抗體等優(yōu)點。,交 叉 配 血（MPT）,【方法學評價】本法是確定不完全抗體最可靠的方法※，但操作較繁瑣，需多次洗滌，需要時間長，試劑較貴，故始終未能

18、成為臨床常規(guī)的配血方法。,交叉配血（抗人球蛋白法）,交叉配血試驗的臨床意義,1．進一步驗證受血者和供血者血型鑒定是否正確，發(fā)現(xiàn)ABO系統(tǒng)的不規(guī)則抗體，以避免血型鑒定錯誤而導致的輸血后的嚴重溶血反應(yīng)。,,,,,,2．發(fā)現(xiàn)其他的血型抗體 受、供血者如果ABO血型相同，但其他血型不同時，在交叉配血時也可出現(xiàn)凝集，為避免異型血輸入后的溶血反應(yīng)，在目前許多實驗室都不能進行稀有血型鑒定的情況下，全靠交叉配血發(fā)現(xiàn)這些血型的不同及免疫抗體的存在。,3

19、.當受血者一次輸血超過1600～2000m1，或在48小時內(nèi)輸入5L或更多血時,稱為大量輸血,這時就需要多個供血者的血液,在配血時不但受血者和供血者之間要交叉配血,多個供血者之間也應(yīng)互相交叉配血,為保證受血者的安全，要求主側(cè)、次側(cè)及獻血員之間交叉配血均不凝集時，方可輸血。,4.在急診配血時, 對急需情況可采用試管法配血，在15min內(nèi)發(fā)血。對特急情況應(yīng)立即發(fā)給O型濃縮紅細胞或低凝集價的O型全血。然后盡快復(fù)查血型和配血，如表現(xiàn)有配血禁忌，

20、應(yīng)立即通知負責醫(yī)師及時處理。,交叉配血試驗的注意事項,1．用于交叉配血的病人（受血者）血液標本應(yīng)該是抽取的新鮮血，供血者的標本是剛從血袋剪下來的原已加熱封閉兩端小管的血液。 2．采用試管法作交叉配血試驗，最好不用玻片法。,3．用生理鹽水洗滌紅細胞去除血漿，預(yù)防纖維凝塊的形成。4．配血管中發(fā)生溶血現(xiàn)象，表明有抗原抗體反應(yīng)同時還有補體參與，是配血不合的嚴重情況，應(yīng)十分重視。,5．鹽水配血試驗陰性，但有反復(fù)輸血史或妊娠史的受

21、血者，應(yīng)加酶法、抗人球蛋白法等配血。 6．為確保輸血的安全，應(yīng)輸同型血。,三、血型鑒定與交叉配血的異常及其克服辦法,（一）責任性錯誤 血型鑒定和交叉配血的技術(shù)并不復(fù)雜，因配血錯誤而導致輸入不合血液的事故中，大多數(shù)是因為不嚴格執(zhí)行操作規(guī)程或操作過程中精神不集中所致，因此為杜絕責任性錯誤首先應(yīng)該熟悉操作規(guī)程并嚴格執(zhí)行。,（二）假 陰 性1.標準血清不符合要求2.被檢紅細胞抗原性減弱3.紅細胞懸液濃度配置不當4.

22、將溶血反應(yīng)誤認為不凝集5.血型物質(zhì)的中和作用,（三）假 陽 性 1.紅細胞呈緡錢狀排列 2.冷凝集 3.全凝集與多凝集 4.類B抗原 5.自身免疫性溫性抗體,冷凝集,冷凝集素是指冷反應(yīng)型抗紅細胞抗體，這些自身抗體只能在低溫時與紅細胞膜相關(guān)抗原結(jié)合。疑為存在冷凝集時，正定型采用經(jīng)37度生理鹽水洗滌的紅細胞3次，反定型采用患者經(jīng)4度放置1hr后分離的血清，將反應(yīng)管放37度水浴5min后觀察結(jié)果。交叉配血存在冷凝集現(xiàn)象時，仍然

23、認為交叉配血是相合的，可以輸血。但需提醒臨床保溫輸血。,紅細胞呈緡錢狀排列,某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相對或絕對性增高，使紅細胞成錢串狀排列，外觀類似凝集，真與假的區(qū)別是在鏡下觀察時，假凝集紅稀薄成錢串狀排列，形狀基本完整，加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢串狀排列消失，而真凝集加等滲鹽水紅細胞不會散開。,全凝集或多凝集現(xiàn)象,正常人紅細胞上有T抗原，血清中有抗T，但因紅細胞表面存在的唾液酸使T抗原無活性，如

24、果紅細胞被細菌污染，細菌酶消化了紅細胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，可與多數(shù)人血清凝集稱為多凝集，如與所有人血清都凝集稱為全凝集。出現(xiàn)這兩種現(xiàn)象時可用多份AB型血清加以證實，因此種現(xiàn)象與AB型血清也發(fā)生凝集，應(yīng)重新抽血。,交叉配血試驗中的不配合問題,首先應(yīng)考慮受血者和供血者的血型鑒定是否有錯。必須重新鑒定血型，必要時進行Rh血型鑒定及抗體篩選。,其次，應(yīng)注意有無特異性同種抗體、特異性未知的同種抗體存在。,交叉配血試驗中不配合的處理