含量測定三藥物分析

1、第九章,維生素類藥物的分析,第一節(jié) 概述,維生素： 是維持人體正常代謝機(jī)能所必需的 微量營養(yǎng)物資。 人體不能合成維生素。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺,VitM,VitPP,,,-H 維生素A醇-COCH3 維生素A醋酸酯-COC15H31

2、 維生素A棕櫚酸酯,R :,第二節(jié) 維生素A,為一個(gè)具有共軛多烯側(cè)鏈的 環(huán)己烯,（一）,具有UV吸收,存在多種立體異構(gòu)化合物,維生素A 325.5 100% 新維生素Aa 328 75%新維生素Ab 320.5 24%新維生素Ac 310.5

3、 15%異維生素Aa 323 21%異維生素Ab 324 24%,,相對(duì)生物效價(jià),VitA2,VitA3,易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng),鯨醇,△或有金屬離子存在時(shí)氧化,環(huán)氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,不溶于水易溶于有機(jī)溶劑和植物油等,條件 無水、無醇,CHCl3,藍(lán)色,紫紅,（BP（1998）

4、）,λmax為326nm一個(gè)吸收峰,λmax為350～390nm三個(gè)吸收峰,去水VitA（VitA3）,↓,VitA,USP 顯色劑 磷鉬酸 規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值,BP 雜質(zhì)對(duì)照品法 顯色劑 三氯化銻,立體異構(gòu)體氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物合成中間體去氫維生素A（ VitA2）去水維生素A（ VitA3）,UV法,（一）,三點(diǎn)校正法1. 條件：（1）雜質(zhì)的吸收在

5、310~340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減小；（2）物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。,,2. 波長的選擇：（1） ?1 VitA的?max（328nm）（2） ?2 ?3 分別在?1的兩側(cè)各選一點(diǎn),測定對(duì)象 VitA醋酸酯,第一法 等波長差法,第二法 等吸收度法(皂化法),測定對(duì)象 VitA醇,測定法（1）基本步驟:第

6、一步 A選擇選擇依據(jù)：所選A值中雜質(zhì)的干擾已基本消除,注意： C 為混合樣品的濃度,第二步 求,第三步 求效價(jià),換算因數(shù)由純品計(jì)算而得：,第四步：求標(biāo)示量％,方法：,（2）,第一法,維生素A醋酸酯,判斷 是否在326～329nm之間,在326～329nm之間,,,改用第二法,是,否,求算 并與規(guī)定值比較,,,規(guī)定值 差值,判斷差值是否超過規(guī)定值的,有一個(gè)以上超

7、過,無超過,,,計(jì)算 A328（校正）,用A328計(jì)算,,,,,第二法,第二法,VitAD膠丸中VitA的含量測定 精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度

8、為,A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216,A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299,求本品中維生素A的含量？,A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A3

9、28/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+ 0.01－0.01 0 + 0.02 + 0.04,－－－－－,=====,適用于維生素A醇,（等吸收度法）,第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法,[ 皂化法、6/7A法 ],（3）第二法,水溶性,脂溶性,判斷?max是否在323～3

10、27nm之間,取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定,,,計(jì)算,是,否,判斷 A300 /A325 是否大于0.73,,,是,否,取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定,計(jì)算A325(校正),,,,,,0,3%,－3%,,,,三氯化銻比色法,（二）,優(yōu)點(diǎn) 簡便 快速,λmax 618nm～620nm,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,苯并－二氫吡喃醇,第三節(jié) 維生素E,,,*,*,*,生物效價(jià) 右旋體 ： 消旋體 = 1

11、.4 ：10,（天然品）,（合成品）,dl－α－生育酚醋酸酯,結(jié)構(gòu)與性質(zhì),一、,苯環(huán) + 二氫吡喃環(huán) + 飽和烴鏈,1、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水,2、UV,3、酯鍵 易水解,（一）,硝酸反應(yīng),橙紅色,（橙紅色）,生育紅,生育酚,,HNO3,,強(qiáng)氧化劑,取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75℃加熱15分鐘，溶液應(yīng)顯橙紅色。,三氯化鐵－聯(lián)吡啶反應(yīng),（二）,生育酚,對(duì)-生育醌,,弱氧化劑,紅色,= 4

12、1.0～45.5,λmax = 284nm,λmin = 254nm,0.01%無水乙醇中,維生素EUV圖,薄層板 硅膠G,展開劑 環(huán)己烷 -乙醚（4 ：1）,顯色劑 硫酸（105℃ 5′）,VitE Rf = 0.7,游離生育酚,硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃→灰紫）,利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰,試劑,（二）,（M生育酚= 430.8）

13、,例,取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過 1.0ml。,≤2.15％,藥典規(guī)定,消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）≤1.0ml,設(shè)：應(yīng)消耗硫酸鈰液≤ V ml,0.01×1.0 ＝實(shí)際濃度× V,若硫酸鈰液濃度不是0.01000mol/L，應(yīng)重新計(jì)算硫酸鈰的消耗量,,例 Ce(SO4)2 = 0.01020

14、mol/L,GC法,（一）,GC特點(diǎn),1、,選擇性好靈敏度高速度快分離效能好,揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強(qiáng)→衍生化易受樣品蒸氣壓限制,載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔(dān)體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測器→氫火焰離子化檢測器(FID)內(nèi)標(biāo)→正三十二烷 n ≥ 500 R≥2,內(nèi)標(biāo)加校正因子法,內(nèi)標(biāo)法,供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）,內(nèi)標(biāo)物,對(duì)照液（對(duì)照+內(nèi)標(biāo)）,校正因子：,實(shí)際工作中的計(jì)算方法,例,內(nèi)標(biāo)液 取

15、正三十二烷加正己烷溶解 并稀釋成1.0mg/ml溶液,對(duì)照液 精密稱取VitE對(duì)照品0.2011g 置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi) 標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取 1~3ul注入GC儀，測定，計(jì)算,供試液 精密稱取供試品0.1998g置棕 色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液 10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul 注入GC儀，測定

16、，計(jì)算,對(duì)照液,供試液,本品含C31H52O3應(yīng)為96.0 ~ 102.0%,BP GC 內(nèi)標(biāo) 正三十二烷 R≥1.4,USP GC 內(nèi)標(biāo) 十六酸十六醇酯 R≥1.0,JP HPLC 外標(biāo) dl－α－生育酚 R≥1.4,利用

17、生育酚的易氧化性,還原型,氧化型,二苯胺（亮黃→灰紫）,△,,,防止Ce(SO4)2的水解減慢生育酚被O2氧化速度,C、酸性條件,Ce(SO4)2易溶于水生育酚易溶于醇,B、溶劑,分子量較大，反應(yīng)慢 易被O2氧化,A、反應(yīng)速度,MVitE = 472,樣品→ dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相→甲醇-水（49 ：1）檢測波長→292nm R＞2.6 RSD≤0.8%,測定對(duì)象→血清中VitA和Vit

18、E固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相→甲醇-水（96 ：4）檢測波長→ 8′前330nm 8′后292nm,氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿),第四節(jié) 維生素B1,,,HCl,Cl-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,（二）,UV,共軛雙鍵,λmax = 246nm,嘧啶環(huán) —— 伯氨,噻唑環(huán) —— 季銨,1、可與酸成鹽,2、與生物堿↓→↓,3、含量測定 ——

19、非水堿量法,（三）,硫色素反應(yīng),（四）,堿性,ChP,,,,硫色素,,,＋2H,,VitB1,H+,H+,H+,H+,S元素反應(yīng),Cl-反應(yīng),,喹那啶紅－亞甲藍(lán) （紫紅→天藍(lán)）,UV法,（二）,片劑、注射劑,= 421,（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=,,A = ECL,規(guī)格g/片,g/100ml,,,,g,,ChP,（每ml）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=,規(guī)格g/ml,ml,,,準(zhǔn)確度高靈敏度低操作繁瑣設(shè)備簡單,2×337

20、.27,3479.22,取本品約50mg，精密稱定，加水50ml溶解后，加鹽酸2ml，煮沸，立即滴加硅鎢酸試液4ml，繼續(xù)煮沸2分鐘，用80℃恒重的垂熔玻璃坩堝濾過，沉淀先用煮沸的鹽酸溶液（1→20）20ml分次洗滌，再用水10ml洗滌1次，最后用丙酮洗滌2次，每次5ml，在80℃干燥至恒重，精密稱定，所得重量與0.1939相乘，即得,,,,,,,,,,例,精密稱取本品0.0519g，加水50 ml溶解，加鹽酸2ml煮沸，立即滴加硅

21、鎢酸試液4 ml，繼續(xù)煮沸2分鐘，用80℃恒重的垂熔玻璃坩堝濾過，沉淀先用煮沸的鹽酸溶液（1→20）20 ml 分次洗滌，再用水10ml 洗滌1次，后用丙酮洗滌2次，每次5ml。在80℃干燥至恒重，稱得沉淀重量為0.2557g。求本品的含量按干燥品計(jì)算為多少？,(本品干燥失重項(xiàng)下測定結(jié)果為3.73%),A. 取樣量±50mg 提高靈敏度,B. 80℃ 保持4個(gè)H2O,C. HCl

22、 增大沉淀顆粒,D. 硅鎢酸 ：VitB1 = 8 ：1 使沉淀完全,E. 硅鎢酸邊攪拌邊緩慢加入 增大沉淀顆粒,NaOH,激發(fā)波長365nm發(fā)射波長435nm,+ NaOH + 鐵氰化鉀 + 異丁醇+ NaOH + 異丁醇,,+ NaOH + 鐵氰化鉀 + 異丁

23、醇+ NaOH + 異丁醇,,S,d,A,b,對(duì)照液,供試液,（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產(chǎn)物不干擾，適用于 體液分析,第五節(jié) 維生素C,L－抗壞血酸,二烯醇結(jié)構(gòu),二酮基結(jié)構(gòu),二烯醇結(jié)構(gòu),有活性,有活性,無活性,△,糖類的顯色反應(yīng),50℃,結(jié)構(gòu)與糖類相似,C3－OH的pKa = 4.17,C2－OH的pKa = 11.57,,,一元酸,L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng),手性C（C4、C5）,*,*,

24、與堿反應(yīng),,1、與AgNO3反應(yīng),2、與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng),(ChP2005),氧化型,,,玫瑰紅色,,,(ChP2005),（玫瑰色）,（無色）,,3、與堿性酒石酸銅反應(yīng),USP,4、與KMnO4反應(yīng),或鹽酸,50℃,吡咯,USP,,（藍(lán)色）,(糠醛),（戊糖）,BP,0.01mol/L HCl,指示劑 淀粉指示液,,H+,取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，

25、立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6,,,,,（1）酸性環(huán)境 d . HCl,（2）新沸冷H2O,減慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,趕走水中O2,減少O2的干擾,（4）附加劑干擾的排除,片劑 —— 滑石粉 —— 過濾,,,,,,USP,JP,,（2）快速滴定 2min內(nèi),（1）酸性環(huán)境

26、 HPO3-HAc,穩(wěn)定VitC,防止其他還原性物質(zhì)干擾,（3）剩余比色測定,（定量過量）,（測剩余染料）,,,（4）缺點(diǎn),需經(jīng)常標(biāo)定,貯存≤一周,干擾多 氧化力較強(qiáng),1、HPLC的優(yōu)點(diǎn),靈敏度高,選擇性高,分離分析同步,微量分析,干擾少,快速,2、HPLC法分離VitC常用方法及測 定對(duì)象,對(duì)象 制劑、生物樣品、果汁,方法 離子交換色譜法 離子對(duì)色譜法

27、 分配色譜法（正、反相）,血、尿、組織、細(xì)胞等,,例,多種維生素片中VitA、 VitB1、 VitB2 、VitB6 、煙酰胺、VitC、VitE的含量測定,色譜柱 ODS流動(dòng)相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇 （梯度洗脫）抗氧劑 二巰基丙烷磺酸鈉,水溶性維生素

28、 離子對(duì)色譜法（樟腦磺酸） 內(nèi)標(biāo)法 + 校正因子 內(nèi)標(biāo)物——苯酚,脂溶性維生素 外標(biāo)法,例題．在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng) 水解、脫羧、失水后，加入吡 咯即產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是 A. 氯氮卓 B. 維生素A C. 普魯卡因

29、 D. 鹽酸嗎啡 E. 維生素C,,例題．中國藥典（2005年版）采用 以下何法測定維生素E含量 A. 酸堿滴定法 B. 氧化還原法 C. 紫外分光光度法 D. 氣相色譜法

30、 E. 非水滴定法,,例題．中國藥典（2005年版）采用 氣相色譜法測定維生素E含 量，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為 A. 正二十二烷 B. 正二十六烷 C. 正三十烷 D. 正三十二烷

31、E. 正三十六烷,,例題. 下列藥物的堿性溶液，加入 鐵氰化鉀后，再加正丁醇， 顯藍(lán)色熒光的是 A. 維生素A B. 維生素B1 C. 維生素C D. 維生素D E. 維生素E,,例

32、題．既具有酸性又具有還原性的 藥物是 A. 維生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 維生素C,,例題.維生素C的鑒別反應(yīng)，常采 用的試劑有

33、 A. 堿性酒石酸銅 B. 硝酸銀 C. 碘化鉍鉀 D. 乙酰丙酮 E. 三氯醋酸和吡咯,,,,例題. 測定維生素C注射液的含量 時(shí)，在操作過程中要加入 丙酮，這是為了

34、 A. 保持維生素C的穩(wěn)定 B. 增加維生素C的溶解度 C. 使反應(yīng)完全 D. 加快反應(yīng)速度 E. 消除注射液中抗氧劑的干擾,,例題. 能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物 是 A. 維生素A B. 維生素B1

35、 C. 維生素C D. 維生素E E. 煙酸,,例題．使用碘量法測定維生素C的 含量,已知維生素C的分子量 為176.13，每1ml碘滴定液 (0.1mol/L) 相當(dāng)于維生素C 的量為 A. 1

36、7.61mg B. 8.806mg C. 176.1mg D. 88.06mg E. 1.761mg,,例題: 可發(fā)生以下反應(yīng)或現(xiàn)象的藥物為 A.維生素B1 B.維生素C C.兩者均能 D.兩者均不能 1.與碘化汞鉀生成

37、黃色沉淀 2.麥芽酚反應(yīng) 3.在乙醚中不溶 4.與2,6-二氯靛酚反應(yīng)使顏色消失 5.硫色素反應(yīng),A,D,C,B,A,例題．維生素A的鑒別試驗(yàn)為 A. 三氯化鐵反應(yīng) B. 硫酸銻反應(yīng) C. 2,6-二氯靛酚反應(yīng) D. 三氯化銻反應(yīng) E. 間二硝基苯的堿性乙醇液反

38、 應(yīng),,例題．中國藥典（2005年版）規(guī)定維生 素A的測定采用紫外分光光度法 （三點(diǎn)校正法），此法又分為 A．等波長差法 B．等吸收度法 C．6/7 A法 D．差示分光法 E．雙波長法,,,,例題．維生素E的鑒別試驗(yàn)有 A．硫色素反應(yīng) B．硝酸氧化呈色反應(yīng)

39、 C．硫酸-乙醇呈色反應(yīng) D．堿性水解后加三氯化鐵乙醇 液與2,2-聯(lián)吡啶乙醇液呈色反 應(yīng) E．Marquis反應(yīng),,,例題. 下面哪些描述適用于維生素A A. 分子具有長二烯醇側(cè)鏈，易被氧化 B. 具有較長的全反式共軛多烯結(jié)構(gòu) C.含酯鍵，經(jīng)水解后產(chǎn)生苯并二氫吡 喃衍生物，易被氧化 D.與三氯化銻的無醇氯仿液中呈不穩(wěn)

40、 定蘭色，很快轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色 E.樣品用無水乙醇溶解后，加硝酸加 熱后，呈橙紅色,,,維生素A與 反應(yīng)即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色；反應(yīng)需在 條件下進(jìn)行。 （ ） 維生素A分子中由于具有共軛多烯側(cè)鏈，因而其性質(zhì)很穩(wěn)定，不易被氧化變質(zhì)。,三氯化銻,無水,×,維生素E在酸性或堿性溶液中加熱可水解生成游離 ，當(dāng)有氧或其他氧化

41、劑存在時(shí)，則進(jìn)一步被氧化成醌型化合物，尤其在堿性下更易發(fā)生。,生育酚,維生素B1 的噻唑環(huán)在 介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上氨基縮合環(huán)合，然后經(jīng) 等氧化劑氧化生成具有熒光的 ，加 熒光消失，加 熒光又顯出；此反應(yīng)稱為 反應(yīng)。,堿性,鐵氰化鉀,硫色素,酸,堿,硫色素,維生素C是

42、 元弱酸，具有強(qiáng) 性，易被氧化劑氧化，常用作其它制劑的 劑。,一,還原,抗氧,例題. 維生素E中游離生育酚的檢查時(shí)規(guī)定消耗硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）不得過1.0ml，現(xiàn)硫酸鈰滴定液的實(shí)際濃度為0.01053mol/L，應(yīng)不得超過多少ml？ A. 0.95 B. 0.97 C.

43、0.99 D. 0.92 E. 1.05,,中國藥典維生素C的含量測定 取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。 已知：取樣量為0.2084

44、g，消耗碘滴定液（0.09981mol/L）22.75ml。,要求：（1）解釋劃線部分 （2）計(jì)算本品的含量是否符合 規(guī)定（規(guī)定本品含C6H8O6應(yīng)不低于99.0%）,VitB1片UV法含量測定 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于VitB1 25mg），置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(9→1000)約70ml，振搖15分鐘，加鹽酸溶液

45、(9→1000)稀釋至刻度。用干燥濾紙濾過，精密量取續(xù)濾液5.0ml，置另一100ml量瓶中，再加鹽酸溶液(9→1000)稀釋至刻度，搖勻，在246nm處測定吸收度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系數(shù)（ ）為421計(jì)算，即得。,已知 20片重 = 1.4070g A246=0.461 取樣量 = 0.1551g 規(guī)格 = 10mg/片