臨床微生物項(xiàng)目與樣本采集規(guī)范

1、臨床微生物項(xiàng)目與樣本采集規(guī)范,匯報(bào)提綱,2,02,03,微生物新項(xiàng)目組合,微生物項(xiàng)目采集規(guī)范,01,微生物新技術(shù),3,,,1,微生物新技術(shù),MALDI-TOF-MS16S rRNA和真菌ITS/D2（28S)測(cè)序,微生物新技術(shù),4,微生物質(zhì)譜儀,16S rRNA,6,判斷16S rRNA序列擴(kuò)增是否成功：經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳在1500bp附近出現(xiàn)條帶，說(shuō)明16S rRNA已經(jīng)擴(kuò)增成功。由于16S rRNA序列長(zhǎng)度一般1500bp左右。

2、,,7,GCATGCGGCGTGCTATACATGCAAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATTGGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGTTTGAAAGATGGCTTCGGCTATCACTTTGGATG

3、GTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCCGACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAG

4、AACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAG

5、TGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAG

6、TACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCA

7、ACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATG

8、AAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCTGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTAACCTTTTAGGAACCAGCCGCCTAAGGTGACAGAGATGG,16Sr DNA測(cè)序獲得序列,8,BLAST比對(duì),9,苛養(yǎng)菌、厭氧菌、少見(jiàn)菌,10,杭州艾迪康少見(jiàn)菌分享,11,眼科醫(yī)院角膜組織---

9、--鏈格孢霉,,12,纖毛菌——血培養(yǎng),,,13,女性.65歲，尿液標(biāo)本,苛養(yǎng)菌、少見(jiàn)菌 ——艾迪康微生物實(shí)驗(yàn)室,14,傷口分泌物，泥土味很重，咬瓊脂，G+桿菌?！溍咕?,15,16,,,2,微生物項(xiàng)目組合,臨床標(biāo)本的分類,17,臨床微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目,18,臨床微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目,19,臨床微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目,20,若只送陽(yáng)性菌株鑒定的情況，請(qǐng)按16S測(cè)序（自主定價(jià)）或微生物質(zhì)譜。

10、,,21,22,,,3,微生物項(xiàng)目采集規(guī)范,臨床醫(yī)生最不能接受的微生物報(bào)告結(jié)果:1.陽(yáng)性率低！2.三種菌以上，疑是標(biāo)本污染！,23,正確的采取、處理與運(yùn)送標(biāo)本,1.及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，將污染情形降至最低。4.采樣后立即送檢（最好在2h內(nèi),保存不超過(guò)24h ），甚至床旁接種尤其是厭氧培養(yǎng)，棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基，盡量不要以棉花拭子收集樣本。5. 標(biāo)本容器須滅

11、菌處理，但不得使用消毒劑。6.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源，檢驗(yàn)?zāi)康?，臨床診斷7.混有正常菌群的標(biāo)本如痰、尿、傷口拭子，不可置肉湯培養(yǎng)。8.安全：標(biāo)本收集時(shí)，注意安全防護(hù)；標(biāo)本收集后，須避免他人被感染。,24,微生物樣本采樣基本原則,一、血培養(yǎng)操作規(guī)范,25,,,,26,,27,血培養(yǎng)陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì),,,28,血培養(yǎng)檢出率,,,,,,29,血培養(yǎng)污染和假陽(yáng)性,,,,CLSI建議方針對(duì)于每位需要血培養(yǎng)的患者需采取2至3套（一瓶需氧瓶和一瓶厭氧瓶

12、為一套）。嬰幼兒則只采集一瓶需氧瓶培養(yǎng)。對(duì)于成年患者的血培養(yǎng)，只采單一的血培養(yǎng)是不允許的。因?yàn)閱我谎囵B(yǎng)的結(jié)果的臨床意義很難解釋。采血培養(yǎng)后的2至5天內(nèi)，不需要重復(fù)采血培養(yǎng)，因?yàn)橹委熀蟮?至5天內(nèi)血液中的感染細(xì)菌不會(huì)馬上消失。,30,血培養(yǎng)的套數(shù),,,31,,32,血培養(yǎng)假陽(yáng)性的危害,1、增加患者抗生素用量，破壞其微生態(tài)環(huán)境2、延長(zhǎng)了住院天數(shù)3、延誤病情診斷4、增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)防止皮膚寄生菌或環(huán)境微生物污染,,33,關(guān)于采血的

13、一些問(wèn)題,,34,血培養(yǎng)送檢指征（需100%送檢率）,采血培養(yǎng)應(yīng)該在使用抗生素之前進(jìn)行，如已應(yīng)用抗菌藥物進(jìn)行治療，應(yīng)在下一次用藥之前采血培養(yǎng)間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前0.5小時(shí)采集血液，不知發(fā)熱規(guī)律應(yīng)在寒戰(zhàn)或發(fā)熱后半小時(shí)后進(jìn)行。,35,采血時(shí)機(jī),,36,,,37,血培養(yǎng)采集流程,,38,血培養(yǎng)采集流程,,39,血培養(yǎng)采集流程,,40,血培養(yǎng)采集流程,,41,血培養(yǎng)采集流程,,42,血培養(yǎng)采集流程,（除血液、骨髓、腦脊液

14、外）的無(wú)菌體液胸水、腹水、關(guān)節(jié)腔積液、鞘膜積液、盆腔積液、心包積液等全身各個(gè)部位的體液穿刺采集方法同血培養(yǎng)；嚴(yán)格無(wú)菌操作，抗菌藥物使用前采集,二、穿刺液操作規(guī)范,43,采集足夠的量（＞10ml），同時(shí)注入需氧和厭氧瓶；若標(biāo)本量少（>2ml），可以只注入需氧瓶；若＜2ml，直接床旁接種巧克力平板和血平板；再留至少0.5ml樣本于無(wú)菌管內(nèi)用于標(biāo)本涂片。,,44,項(xiàng)目組套一套血培養(yǎng)（一套為血培養(yǎng)及鑒定（需氧培養(yǎng)）+厭氧菌

15、培養(yǎng)及鑒定（厭氧培養(yǎng)）+一般細(xì)菌涂片,,45,若標(biāo)本量少（≥3ml），注入兒童瓶；若＜3ml，直接床旁接種巧克力平板和血平板；再留至少0.5ml樣本于無(wú)菌管內(nèi)用于標(biāo)本涂片。,三、腦脊液操作規(guī)范,46,項(xiàng)目組套一般細(xì)菌涂片+一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+真菌培養(yǎng)及鑒定+常規(guī)藥敏定量試驗(yàn)(MIC),,47,采集方式：漱口后，用力咳出采集時(shí)間：用藥前送檢：置無(wú)菌容器或運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)立即送檢,48,四、痰液標(biāo)本采集和運(yùn)送,,,49,,,50,一般

16、細(xì)菌涂片+一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+真菌培養(yǎng)及鑒定+嗜血桿菌培養(yǎng)及鑒定+常規(guī)藥敏定量試驗(yàn)(MIC),呼吸道組套,51,不可避免地受到污染唾液中口咽部定植菌的濃度可達(dá)108 ～ 109/ml。研究顯示，國(guó)內(nèi)常規(guī)痰標(biāo)本中約半數(shù)存在唾液嚴(yán)重污染現(xiàn)象。,52,咳痰途經(jīng)口咽部,如果低倍視野下鱗狀上皮細(xì)胞大于25個(gè)，白細(xì)胞小于10個(gè)，應(yīng)不做或僅在特殊要求時(shí)做培養(yǎng)。如做培養(yǎng)，報(bào)告中注明“鏡檢結(jié)果表明標(biāo)本口咽分泌物污染明顯”。,53,咳痰標(biāo)本不合

17、格，退檢嗎？,對(duì)于普通細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)2～3天。不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀出現(xiàn)改變；懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢；,54,痰培養(yǎng)的送檢次數(shù),采集時(shí)間：用藥前采集方法：膿血和黏液；對(duì)不易獲得糞便患者及幼兒，可用直腸拭子采集后置保存液或輸送培養(yǎng)基中送檢。送檢：置無(wú)菌容器或運(yùn)送培養(yǎng)基立即送檢避免在服用硫酸鋇、油、鎂或結(jié)晶物后立即采集標(biāo)本；如服用過(guò)這些物品，至少在5d后再采集標(biāo)本。

18、,55,五、大便培養(yǎng)標(biāo)本采集規(guī)范,,注意事項(xiàng),56,一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+沙門菌和志賀菌培養(yǎng)及鑒定+真菌培養(yǎng)及鑒定+常規(guī)藥敏定量試驗(yàn)(MIC)一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定監(jiān)測(cè)患者腸道菌群失調(diào)；真菌培養(yǎng)及鑒定監(jiān)測(cè)患者有無(wú)抗生素用量過(guò)渡，有無(wú)絲狀真菌引起的腸道腹瀉；沙門志賀培養(yǎng)及鑒定為腸道常見(jiàn)致病菌。,項(xiàng)目組合,57,推薦使用男性或女性專用拭子，置運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。男性前列腺：用肥皂和水清洗陰莖頭，通過(guò)直腸按摩前列腺，用無(wú)菌拭子收集液體或使液

19、體進(jìn)入無(wú)菌管內(nèi)。男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2～4cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20s，而使之容易吸收。,58,六、生殖道標(biāo)本采集規(guī)范,女性陰道：擦除過(guò)多的分泌物和排出液，用2支無(wú)菌拭子從陰道穹隆部黏膜處獲取分泌物。 1支需要涂片,1支拭子做培養(yǎng)。宮頸：用無(wú)潤(rùn)滑劑的擴(kuò)陰器使宮頸可見(jiàn)，用拭子從宮頸上拭去黏液和分泌物，丟掉拭子，用新的無(wú)菌拭子緊帖宮頸內(nèi)道輕輕采樣。后穹窿：送抽吸液。,,59,,,60,生殖道分泌物培養(yǎng)（女）：包括陰

20、道分泌物、宮頸分泌物、后穹窿分泌物①支原體+衣原體+一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+常規(guī)藥敏定量試驗(yàn)(MIC)+念珠菌培養(yǎng)及鑒定；生殖道分泌物培養(yǎng)（男）：包括前列腺液、精液、尿道分泌物一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+常規(guī)藥敏定量試驗(yàn)(MIC)一個(gè)項(xiàng)目一個(gè)標(biāo)本,61,,因淋病奈瑟菌對(duì)溫度相當(dāng)敏感。應(yīng)以專用拭子采集的標(biāo)本，應(yīng)盡快送檢（或床旁接種），不可置于冰箱保存。直接接種標(biāo)本于淋球菌專用培養(yǎng)基培養(yǎng)。,62,,一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+常規(guī)藥敏定量試驗(yàn)(MI

21、C)+真菌培養(yǎng),63,七、泌尿標(biāo)本采集的規(guī)范,1 有典型的尿路感染癥狀；2 肉眼膿尿或血尿；3 尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞和/或亞硝酸鹽陽(yáng)性；4 不明原因的發(fā)熱，無(wú)其他局部癥狀；5 留置導(dǎo)尿管的病人出現(xiàn)發(fā)熱；6 膀胱排空功能受損；7 泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前。,64,尿液培養(yǎng)標(biāo)本送檢指征,正常人尿液是無(wú)菌的，而尿液細(xì)菌培養(yǎng)最大的問(wèn)題是雜菌污染。正常人外尿道有大腸桿菌、葡萄球菌等存在。而這些細(xì)菌又是尿路感染中常見(jiàn)的病源菌，但定量培養(yǎng)時(shí)計(jì)

22、數(shù)不會(huì)超過(guò)103CFU/ml， 泌尿系感染時(shí)定量培養(yǎng)在104～105CFU/ml 。,65,您知道嗎？,標(biāo)本采集應(yīng)力爭(zhēng)在未使用抗生素之前．注意避免消毒劑污染標(biāo)本 清潔中段尿中段尿（晨尿最佳）約10 ～ 20ml直接排入專用的無(wú)菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種，或24小時(shí)內(nèi)冷藏保存。留置導(dǎo)尿管收集尿液：穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液，不能從收集袋中采集尿液。長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿患者，應(yīng)在更換新尿管時(shí)留取尿標(biāo)本。恥骨上膀胱穿刺：評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“

23、金標(biāo)準(zhǔn)”方法直接導(dǎo)尿：可減污染，準(zhǔn)確反映膀胱感染情況。,66,尿培養(yǎng)樣本采集方法,采集中段尿時(shí)要先用肥皂清洗女性的外陰和男性的外生殖器包括包皮內(nèi)，然后用清水沖洗。長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管的患者應(yīng)在更換新管時(shí)留取尿標(biāo)本。 做厭氧培養(yǎng)時(shí)應(yīng)膀胱穿刺采集尿。,67,尿培養(yǎng)樣本采集規(guī)范,申請(qǐng)單上必須注明病人癥狀是否明顯，這對(duì)于定量培養(yǎng)分析非常重要，尤其只有少量尿液標(biāo)本。室溫都有利于病原菌和污染菌會(huì)生長(zhǎng)繁殖，因此若30min內(nèi)不能及時(shí)培養(yǎng)尿液則

24、必須冷藏，但也不能超過(guò)24小時(shí)。,68,特別注意,采集方式：用碘酒，酒精消毒皮膚后，以無(wú)菌注射器抽取膿液采集時(shí)間：用藥前送檢：置運(yùn)送培養(yǎng)基立即送檢,69,八、傷口創(chuàng)面和膿液 —— 封閉性膿腫,項(xiàng)目組合一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+藥敏+真菌培養(yǎng)及鑒定+藥敏 深部傷口：請(qǐng)選擇一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定+藥敏+真菌培養(yǎng)及鑒定+厭氧菌培養(yǎng),,70,標(biāo)本采集要記牢，無(wú)菌采集是提前；若已早用抗生素，停后用前

25、觀時(shí)候。發(fā)熱要做血培養(yǎng)，雙側(cè)雙瓶少漏網(wǎng)；何時(shí)采血要記清，寒戰(zhàn)前后菌量濃；取后不能及時(shí)送，常溫放置忌冰凍。尿液培養(yǎng)要計(jì)算，清潔外陰留中段；培養(yǎng)長(zhǎng)出多種菌，辯清污染需重送。胸水腹水腦脊液，放入兒瓶陽(yáng)性多；條件限制無(wú)血瓶，接種平板也可行。無(wú)菌體液較簡(jiǎn)單，迅速送檢少麻煩。最好不取導(dǎo)管液，鑒定繁瑣污染多。傷口膿液取深部，接近新鮮組織處。特殊培養(yǎng)要注意，避免凍傷與自溶。痰液培養(yǎng)雜菌多，清晨漱口要深咳；涂片合格繼續(xù)做，正常致病必掌握。大便要取膿血處。