?；撬岬挚筁PS誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞去功能的作用.pdf

1、本研究首先進(jìn)行了原代小鼠乳腺上皮的體外培養(yǎng)與鑒定，并以原代小鼠乳腺上皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，利用LPS刺激乳腺上皮細(xì)胞，研究乳腺上皮細(xì)胞的主動(dòng)防御功能及LPS對(duì)乳腺上皮細(xì)胞造成的影響，進(jìn)一步揭示了?；撬岬挚筁PS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞去功能的作用.
　　 1小鼠乳腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)與鑒定
　　 無菌采取健康妊娠小鼠的乳腺組織，采用膠原酶和透明質(zhì)酸酶聯(lián)合消化獲得小鼠乳腺上皮細(xì)胞。生長培養(yǎng)液為DMEM/F12，含10％胎牛血清，添加

2、胰島素（5μg/ml），EGF（10ng/mL，）、氫化可的松（1μg/ml）、青霉素（100U/mL）和鏈霉素（100U/mL）。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在生長過程中呈典型的上皮樣形態(tài)；角蛋白免疫熒光染色結(jié)果為陽性，說明該培養(yǎng)體系的細(xì)胞為上皮細(xì)胞；β-casein免疫印跡測(cè)定結(jié)果表明，該乳腺細(xì)胞具有分泌功能。提示成功的分離出了原代小鼠乳腺上皮細(xì)胞，且細(xì)胞的生物學(xué)活性和功能完備，可以作為實(shí)驗(yàn)材料。
　　 2 LPS對(duì)原

3、代小鼠乳腺上皮細(xì)胞的影響
　　 選用體外條件下培養(yǎng)的原代小鼠乳腺上皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，用含LPS終濃度為5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的培養(yǎng)液處理24h后收集上清液和細(xì)胞。與對(duì)照組相比，5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL LPS處理組N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活性、NO含量和IL-1β，TNF-α，IL-6，LF mRNA表達(dá)水平均顯著升高（P<0.01）；10μg/mL、20μg/m

4、L LPS處理組IL-1β，TNF-α，IL-6的含量顯著升高（P<0.05）；20μg/mLLPS顯著降低了β-casein的分泌（P<0.05）。再者，細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)表明，20μg/mL LPS顯著降低細(xì)胞存活率，5μg/mL、10μg/mL LPS處理組與對(duì)照組相比無顯著性差異。說明10μg/mL LPS對(duì)原代小鼠乳腺上皮細(xì)胞的功能造成了影響，但不影響細(xì)胞的存活率。
　　 3?；撬岬挚筁PS誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞去功能的作

5、用
　　 原代小鼠乳腺上皮細(xì)胞，用含有0，5，15，45mmol/L?；撬岬呐囵B(yǎng)液處理細(xì)胞，3h后用10μg/mL的LPS刺激細(xì)胞24h，收集上清液和細(xì)胞。以不添加?；撬岷蚅PS的培養(yǎng)液為正常對(duì)照；以不添加?；撬?，只添加LPS的培養(yǎng)液為陽性對(duì)照。與陽性對(duì)照組相比，5mmol/L，15mmoL/L，45mmol/L?；撬崽幚斫MN-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）的活性和NO的含量顯著降低（P<0.01）；15mmol/