黃芪多糖對LPS誘導奶牛乳腺上皮細胞凋亡的體外保護作用研究.pdf

1、本試驗采用體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞為試驗材料，擬建立大腸桿菌內毒素(LPS)誘發(fā)奶牛乳腺上皮細胞的體外凋亡模型，在此基礎上研究黃芪多糖對LPS誘發(fā)奶牛乳腺上皮細胞凋亡的保護作用;并探討黃芪多糖對炎癥時細胞及其分泌物中若干細胞因子和酶的變化規(guī)律。研究結果可為黃芪多糖等中草藥作為免疫生理調節(jié)劑在動物乳腺炎防治應用中提供新思路，并為奶牛乳房炎的預防與治療提供參考。
　　1.奶牛乳腺上皮細胞體外凋亡模型的建立
　　采用組織塊培養(yǎng)法，

2、建立體外奶牛乳腺上皮細胞培養(yǎng)體系，擬用LPS(0、10、20、50、100、200μg/mL)直接作用于第2代奶牛乳腺上皮細胞，設多個時間點(3、8、16、24h)，分別采用CCK-8、流式細胞儀、DNAladder條帶法及電鏡等試驗技術方法，對乳腺上皮細胞活性、病理組織學變化、以及生物化學特性的變化，以出現(xiàn)細胞凋亡特異性標志為準則確定LPS誘導細胞凋亡的作用時間和作用濃度。試驗結果表明，100μg/mL的LPS作用8h，建立的凋亡模型

3、，為最理想的凋亡模型。
　　2.黃芪多糖對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞凋亡的體外保護作用
　　為研究黃芪多糖對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞凋亡的保護作用，以試驗一建立的奶牛乳腺上皮細胞凋亡模型為試驗材料，將生長狀態(tài)良好的乳腺上皮細胞進行分組試驗，分別分為:空白對照組、LPS模型組、黃芪多糖+LPS模型組，其中黃芪多糖的濃度分別為:1、3和5 mg/mL，共分為五個試驗組。采用CCK-8、流式細胞術、瓊脂糖凝膠電泳及透射電鏡等

4、試驗技術方法進行各項指標測定，結果顯示:與對照相比較，LPS組的細胞活性顯著下降，與LPS組相比較，黃芪多糖各藥物組的細胞活性顯著增強，并呈劑量依賴性關系。黃芪多糖可顯著的把凋亡的細胞阻滯在S期，從而促進細胞DNA合成的增加。提示黃芪多糖對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞凋亡具有拮抗保護作用。
　　3.黃芪多糖對LPS誘導奶牛乳腺上皮細胞炎癥反應的調節(jié)及機制研究
　　為進一步探究黃芪多糖對奶牛乳腺上皮細胞炎癥反應的調節(jié)及機制，本

5、試驗采用放射免疫法測定黃芪多糖對炎癥時細胞及其分泌物中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-2細胞因子含量的變化規(guī)律，并用ELISA檢測各種相關酶NAGase、AKP、MPO、iNOS的活性變化規(guī)律。試驗結果顯示，黃芪多糖在1、3、5 mg/mL的濃度下不會對奶牛乳腺上皮細胞產生毒性作用，且經黃芪多糖預處理后細胞及其分泌物中能夠明顯降低TNF-α、IL-1β、IL-6的含量及NAGase、AKP、MPO、iNOS活性顯著降低。