甘薯葉多酚氧化酶的分離純化及部分性質(zhì)與功能基團研究.pdf

1、多酚氧化酶(polyphenol oxidase，EC1.10.3.1，簡稱PPO)是一類廣泛存在于植物、動物、微生物等體內(nèi)的一類銅結(jié)合酶。多酚氧化酶在植物體內(nèi)能夠催化酚類物質(zhì)生成鄰醌，醌類再進一步氧化生成褐色素。多酚氧化酶是引起果蔬褐變的主要原因之一，會降低果蔬等的營養(yǎng)價值及經(jīng)濟價值，并影響其風味及品質(zhì)。此外，多酚氧化酶與植物抗病、植物光合作用、花色形成、乙烯生成等方面都有聯(lián)系。甘薯葉作為一種耐寒耐貧瘠的綠色蔬菜，含有豐富的礦物質(zhì)、維

2、生素等，可提高人體抗病能力，有降血糖，抗腫瘤等作用，已引起大家廣泛關(guān)注。目前，對甘薯葉多酚氧化酶的分離純化未見報道。本文以甘薯葉為材料，對多酚氧化酶的分離純化、酶學性質(zhì)、抑制劑及功能基團的化學修飾等方面進行了研究，以將甘薯葉的利用價值得到開發(fā)，提高其經(jīng)濟效益。主要研究結(jié)果如下：
　　 本文通過對新鮮甘薯葉進行組織勻漿、磷酸鹽緩沖液抽提得到粗酶，再經(jīng)硫酸銨分級沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析和Superdex-200

3、凝膠過濾層析等純化步驟，最終從甘薯葉中得到了多酚氧化酶的電泳純制品。純化得到的酶比活力為50075.43U/mg，純化倍數(shù)為597.99，回收率為0.48％。
　　 理化性質(zhì)研究表明，甘薯葉多酚氧化酶的全酶的相對分子質(zhì)量128.6kd，亞基相對分子質(zhì)量約為64.4kd，可見該酶由兩個相同的亞基組成。該酶的最適溫度為35℃。在25-55℃內(nèi)酶有較好的穩(wěn)定性。最適pH為6.5，在pH6～7內(nèi)酶較穩(wěn)定。在最適條件下，以不同濃度的鄰苯二

4、酚溶液為底物測得該酶的Km值為0.0445mol/L。
　　 金屬離子Ca2+、Hg2+對甘薯葉多酚氧化酶有明顯的抑制作用；Pb2+、Co2+、Fe2+對甘薯葉多酚氧化酶有明顯的激活作用；K+、Mn2+、Li+、Zn2+、Mg2+、Ba2+對該酶活性基本無影響。
　　 研究有機溶劑對甘薯葉多酚氧化酶的抑制作用，甲醇、乙醇和異丙醇對甘薯葉多酚氧化酶活性抑制強度不同，異丙醇抑制作用最強，乙醇次之，甲醇抑制作用相對最弱。低濃度