斜帶石斑魚(yú)P450芳香化酶基因啟動(dòng)子活性分析.pdf

1、芳香化酶—細(xì)胞色素P450芳香化酶(cyp19基因編碼)和NADPH細(xì)胞色素P450還原酶組成的酶的復(fù)合物，是雄激素轉(zhuǎn)變?yōu)榇萍に剡^(guò)程中的關(guān)鍵酶。在大多數(shù)硬骨魚(yú)中存在著兩種cyp19基因，編碼了兩種不同結(jié)構(gòu)和功能的芳香化酶亞型，在性別分化、生殖周期的調(diào)控、雄性魚(yú)類(lèi)的繁殖行為等方面有重要的作用。目前對(duì)于魚(yú)類(lèi)cyp19基因的調(diào)控機(jī)制還不清楚，本文主要是研究斜帶石斑魚(yú)cyp19基因啟動(dòng)子的活性及調(diào)控方面。 用rVista在線軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)室

2、已獲得的斜帶石斑魚(yú)啟動(dòng)子的保守性進(jìn)行pairwise比對(duì)分析，結(jié)果表明斜帶石斑魚(yú)cyp19ala和cyp19alb基因的近端啟動(dòng)子在硬骨魚(yú)類(lèi)中具有較高的保守性。在cyp19alb近端啟動(dòng)子上都具有RFX，STATI，ERE結(jié)合位點(diǎn)；而在cyp19ala啟動(dòng)子上則具有FOXO家族結(jié)合位點(diǎn)。 本文通過(guò)構(gòu)建斜帶石斑魚(yú)cyp19alb和cyp19ala啟動(dòng)子系列缺失的熒光素酶報(bào)道質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染C6(大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)和TM4(小鼠精巢

3、支持細(xì)胞)細(xì)胞，分析了啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果表明：在TM4細(xì)胞中，cyp19ala基因啟動(dòng)子—246/-112區(qū)域?qū)ζ浠钚跃哂忻黠@的誘導(dǎo)作用，—541/—246區(qū)域?qū)ζ浠钚杂忻黠@的抑制作用；在C6細(xì)胞中，cyp19alb基因啟動(dòng)子—289/—202區(qū)域?qū)ζ浠钚跃哂忻黠@的誘導(dǎo)作用，—921/—378區(qū)域?qū)ζ浠钚跃哂忻黠@的抑制作用。 本文對(duì)cyp19ala啟動(dòng)子上保守的FTZ—F1和SRY位點(diǎn)功能進(jìn)行了探討。突變近端啟動(dòng)子上的FTZ

4、—F1位點(diǎn)明顯降低啟動(dòng)子活性，而突變SRY位點(diǎn)明顯提高啟動(dòng)子活性，說(shuō)明FTZ—F1位點(diǎn)對(duì)cyp19ala啟動(dòng)子活性有正調(diào)控作用，而SRY位點(diǎn)有負(fù)調(diào)控作用。 為了分析實(shí)驗(yàn)室已克隆到的斜帶石斑魚(yú)FTZ—F1和Sox11b是否能調(diào)節(jié)cyp19ala的轉(zhuǎn)錄，本文將FTZ—F1和Sox11b的編碼區(qū)克隆到pcDNA3.0表達(dá)載體中，然后同cyp19ala啟動(dòng)子報(bào)道質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。結(jié)果表明：FTZ—F1在TM4細(xì)胞和COS—7細(xì)胞中對(duì)啟動(dòng)子沒(méi)有