斜帶石斑魚抗菌肽-2的基因克隆、活性及其組織內(nèi)表達(dá).pdf

1、近年來，在養(yǎng)殖業(yè)暴發(fā)的大規(guī)模的感染性疾病導(dǎo)致了海水魚類的大量死亡，而抗菌肽被證明是魚類非特異性免疫的一種主要機(jī)制而可能用于對抗感染性疾病。抗菌肽(antimicrobialpeptides)是具有抗菌活性的肽類的總稱。目前發(fā)現(xiàn)抗菌肽或類似抗菌肽的小分子肽類廣泛存在于昆蟲、水產(chǎn)動物、兩棲類、鳥類、哺乳動物、植物和微生物中。由cDNA編碼的抗菌肽-2是從斜帶石斑魚(orange-spottedgrouper,Epinepheluscoioi

2、des)cDNA文庫中分離出來。這個抗菌肽由52個氨基酸殘基組成，其中包括了信號肽(22個氨基酸殘基)和成熟肽(30個氨基酸殘基)?！　”緦嶒灲Y(jié)果分為以下三部分：首先，運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗菌肽-2(epinecidin-2)的全基因，并與其cDNA序列相比較，從而得到具有3個內(nèi)含子和4個外顯子的基因結(jié)構(gòu)。同時運(yùn)用反向PCR技術(shù)擴(kuò)增得到其上游調(diào)控序列，序列包括了TATA區(qū)，CAAT區(qū)等調(diào)控序列；接著，運(yùn)用化學(xué)固相合成的方法合成高純度的成

3、熟抗菌肽-2，并用稀釋法對16種革蘭氏陰性和陽性菌進(jìn)行了抑菌實驗，這些細(xì)菌大部分都是水生病原菌，其中抗菌肽-2對溫和氣單胞菌、少動假單胞菌、施氏假單胞菌以及摩根爾摩根菌表現(xiàn)了較強(qiáng)的抑菌效果(最低殺死濃度(MBC)＜8μM)，對其他的菌種也有一定的抑菌效果；最后，運(yùn)用半定量RT-PCR和原位雜交方法，檢測抗菌肽-2在斜帶石斑魚各組織(包括心，脾，腦，腎，肝，皮膚，鰓和腸等)的表達(dá)分布，并初步研究注射免疫調(diào)節(jié)劑與抗菌肽表達(dá)量的時間依賴關(guān)系和