大豆肽的制備及其對(duì)小鼠免疫功能的影響.pdf

1、本研究旨在通過(guò)自然環(huán)境中篩選出適合豆粕液體發(fā)酵的菌株，通過(guò)響應(yīng)面分析法優(yōu)化大豆肽液體發(fā)酵工藝，提高蛋白質(zhì)水解度，增加發(fā)酵液中低分子多肽的含量，開(kāi)拓一條低成本大豆肽生產(chǎn)工藝路線。
　　從湛江自然環(huán)境、生長(zhǎng)的植物和動(dòng)物腸道內(nèi)容物中采集樣品98份，用平板透明圈法進(jìn)行初篩，從中分離出117株產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌，其中有11株的透明圖與菌落直徑比值(H/C)大于5.0；用Folin酚法測(cè)定11株芽孢桿菌發(fā)酵液的蛋白酶活力，篩選出菌株y-6產(chǎn)蛋

2、白酶的能力最強(qiáng)，48 h發(fā)酵液中的蛋白酶活力達(dá)2852 IU/mL；通過(guò)形態(tài)染色特性觀察、生理生化試驗(yàn)和16S rDNA基因序列分析，鑒定菌株y-6為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，暫命名為解淀粉芽孢桿菌y-6(Bacillusamyloliquefaciens strainy-6)。
　　將解淀粉芽孢桿菌y-6按4％接種GYP培養(yǎng)基，32℃、180 r/min振蕩發(fā)酵6 h、12 h、18

3、 h、24 h、30 h、36 h、42 h和48 h，4000 r/min離心20 min，取上清液，既為待測(cè)粗酶液；對(duì)粗酶液進(jìn)行蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶等酶活力測(cè)定；結(jié)果表明：48 h的發(fā)酵液中蛋白酶活力為1072.3 IU/mL，淀粉酶活力為3.75 IU/mL，纖維素酶活力為8.35 IU/mL，甘露聚糖酶活力為565.9 IU/mL，無(wú)明顯的果膠酶活性。對(duì)發(fā)酵液中蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示該蛋白酶

4、為中性蛋白酶，在pH7～7.5有最高的酶活力，最適作用溫度為55℃，40℃以下有較好的溫度穩(wěn)定性；該酶不耐受酸性環(huán)境，pH5以下易失活，pH3環(huán)境下保存1 h檢測(cè)不出酶活力；Ca2+、Zn2+及吐溫80對(duì)該酶有一定的激活作用，Mn2+、Fe3+、Cu2+及EDTA對(duì)酶有一定的抑制作用。
　　采用Minitab15.1版軟件安排試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)解淀粉芽孢桿菌y-6發(fā)酵低溫豆粕制備大豆肽的工藝進(jìn)行了研究；采用Plaeke

5、tt-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)pH值、接種量、搖床轉(zhuǎn)速、溫度、裝液量共5個(gè)因素的主效應(yīng)及交互作用進(jìn)行考察，確定了接種量、溫度、搖床轉(zhuǎn)速三個(gè)重要影響因素；利用Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)出15個(gè)試驗(yàn)的響應(yīng)面分析試驗(yàn)，對(duì)接種量、溫度、搖床轉(zhuǎn)速三個(gè)因素做進(jìn)一步的參數(shù)選擇優(yōu)化；優(yōu)化后的參數(shù)為：接種量6.3％，發(fā)酵溫度為39.89℃，搖床轉(zhuǎn)速為187r/min，優(yōu)化參數(shù)后所得試驗(yàn)結(jié)果與回歸模型預(yù)測(cè)吻合較好，說(shuō)明所建立的回歸模型是可靠的，可以較

6、準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)出大豆肽轉(zhuǎn)化率；優(yōu)化發(fā)酵參數(shù)后，大豆肽的轉(zhuǎn)化率由最初的63.7％提高到78.15％。
　　將120只小鼠隨機(jī)分成三批，每批四組，每組10只；對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，三個(gè)試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加1％、2％、4％的自制大豆肽，飼喂小鼠21 d后，測(cè)定免疫器官指數(shù)、血清溶菌酶、巨噬細(xì)胞吞噬功能和血清溶血素；結(jié)果表明：大豆肽可以顯著提高小鼠免疫器官指數(shù)，增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性，激發(fā)小鼠抗雞紅細(xì)胞抗體的產(chǎn)生，而血清溶菌酶活性