紅三葉肽制劑的制備及其對小鼠免疫功能的影響研究.pdf

1、本文對以紅三葉草葉蛋白為原料采用酶解法制備紅三葉肽制劑的工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的研究;同時，還系統(tǒng)研究了紅三葉肽制劑對小鼠免疫等功能的影響。主要結(jié)果如下： 1、通過加鹽量、絮凝溫度、絮凝時間和料水比四因素三水平的正交試驗，得出影響紅三葉干草中葉蛋白提取的最主要因素是料水比。最佳工藝條件為加鹽量3％，料水比1：20，pH 3，70℃條件下絮凝20min。 2、試驗選用7種蛋白酶，在各酶的最適反應(yīng)條件下進(jìn)行酶解試驗，以水解度為指標(biāo)測

2、定各酶對紅三葉葉蛋白的水解效果。結(jié)果表明北京中性蛋白酶的水解效果符合試驗要求，因此選用此酶。 3、選用最佳酶進(jìn)行水解單因素試驗，測定水解各反應(yīng)條件(酶解PH值、溫度、酶活添加量、酶解時間、底物濃度)對水解度的影響，以確定該組合適宜的反應(yīng)條件。結(jié)果表明該酶的適宜反應(yīng)條件為：PH7.6，酶解溫度45℃，酶活添加量6000u每克 4、根據(jù)單因素試驗結(jié)果，對溫度、pH值、酶活添加量、底物濃度這四個因素分三個水平進(jìn)行正交試驗，從而得

3、到提取肽制劑的最佳條件。最終得到最佳提取條件為：水解溫度為45℃，pH值為7.6，酶活添加量為7000U/g，底物濃度為1％。 5、試驗選用昆明種小鼠，隨機(jī)分到4個處理中。3個試驗組分別灌胃濃度依次為5.0mg/mL，1.0mg/mL，0.1 mg/mL的肽制劑溶液，對照組灌胃生理鹽水。連續(xù)用藥2ld，試驗結(jié)束后，立即對小鼠進(jìn)行免疫功能指標(biāo)的測定。試驗結(jié)果表明:(1).低劑量組的脾臟指數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)，所有試驗

4、組的胸腺指數(shù)均顯著提高(P<0.05)，其中高劑量組和中劑量組與對照組間差異極顯著(P<0.0 1)；(2).各個試驗組腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬百分率均顯著提高(P<0.05)，中劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)極顯著高于對照組(P<0.01)；(3).中劑量組和低劑量組的溶血素水平顯著高于對照組(P<0.05)，中劑量組與對照組差異極顯著(P<0.01)；(4).中劑量組T淋巴細(xì)胞百分比高于對照組，但是差異不顯著；(5).低劑量組小