肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良CyclinI，Matrilin3基因的免疫組化與原位雜交研究.pdf

1、肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良（Tibial Dyschondroplasia，TD）是肉雞常見的腿病之一，以脛骨軟骨內(nèi)骨化受阻和脛骨干骺端的軟骨細(xì)胞增生形成無血管的玉白色的“軟骨楔”為特征。TD的發(fā)生與品種、營養(yǎng)、環(huán)境、管理等因素有關(guān)。TD對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失，近年來對(duì)TD的研究逐漸深入，但其發(fā)病機(jī)理仍有待于進(jìn)一步探明。
　　 CyclinⅠ，細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子Ⅰ，屬于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白（Cyclin）家族，在細(xì)胞的分裂與增殖過程中起著

2、重要作用，能調(diào)控細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞生長、細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，調(diào)控腫瘤生長、血管發(fā)生和軟骨內(nèi)骨化；Matrilin3，是一族非膠原性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白家族一員，主要參與胞外基質(zhì)纖維的形成，并可與膠原或非膠原蛋白相連接，調(diào)節(jié)膠原纖維與其它基質(zhì)如蛋白聚糖之間的相互作用，其表達(dá)異?？蓪?dǎo)致骨骺發(fā)育不良，骨關(guān)節(jié)炎等疾病。目前對(duì)于二者在肉雞TD發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)變化研究還較少。
　　 在本課題研究小組前期的研究中，應(yīng)用抑制消減雜交（S

3、SH）技術(shù)及基因芯片技術(shù)篩選出肉雞TD差異表達(dá)基因，其中就包括CyclinI和Matrilin3。為探求二者在肉雞TD不同階段的差異表達(dá)情況，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化和原位雜交方法分別從蛋白和基因水平對(duì)肉雞TD發(fā)生中CyclinI和Matrilin3基因差異表達(dá)的時(shí)序性進(jìn)行研究，取得的結(jié)果如下：
　　 經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，利用福美雙成功誘發(fā)肉雞TD，分四次采樣，取脛骨軟骨生長板，制作組織石蠟切片，提取RNA，構(gòu)建了pGEM-T-CyclinI

4、、pGEM-T-Matrilin3克隆載體，提取質(zhì)粒分別酶切，標(biāo)記DIG-cRNA探針，進(jìn)行原位雜交。CyclinI原位雜交結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，在肉雞TD中CyclinI在不同時(shí)期都出現(xiàn)上調(diào)和下調(diào)的現(xiàn)象：第1、3、4次采樣下調(diào)表達(dá)，第2次采樣上調(diào)表達(dá)。
　　 Matrilin3原位雜交結(jié)果顯示，TD組Matrilin3在不同時(shí)期也出現(xiàn)上調(diào)和下調(diào)表達(dá)，與對(duì)照組比較，第1、2次采樣TD組下調(diào)表達(dá)，而第3、4次上調(diào)表達(dá)。