HSP-90抑制對(duì)福美雙誘導(dǎo)的脛骨軟骨發(fā)育不良肉雞生長板細(xì)胞外基質(zhì)降解的影響.pdf

1、肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良(TD)是由不同病因引起的與跛行相關(guān)的骨骼失調(diào)性疾病。主要特征是病變區(qū)細(xì)胞缺少基質(zhì)蛋白酶以及軟骨區(qū)形成無礦化、無血管化的軟骨栓。
　　1.細(xì)胞外基質(zhì)蛋白誘導(dǎo)因子(EMMPRIN/CD147)在肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良過程中的差異性表達(dá)
　　細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)劑(CD147)廣泛存在于各種細(xì)胞中，它可以通過多種途徑直接誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是研究細(xì)胞外基質(zhì)蛋白誘導(dǎo)因子(

2、EMMPRIN/CD147)在正常組、福美雙誘導(dǎo)肉雞TD組和肉雞TD恢復(fù)組間的基因表達(dá)差異。實(shí)驗(yàn)選擇一種細(xì)胞外基質(zhì)降解酶基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)為對(duì)象來研究CD147對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)降解的影響。應(yīng)用熒光定量PCR檢測各組靶基因表達(dá)水平，免疫組化和蛋白印記研究靶蛋白分布和表達(dá)狀況。實(shí)驗(yàn)肉雞被隨機(jī)分為三組:對(duì)照組、TD發(fā)生組和TD治療組。結(jié)果顯示，TD發(fā)生組CD147和MMP-9的基因表達(dá)出現(xiàn)下調(diào);TD治療組CD147和MMP

3、-9基因水平得到恢復(fù)，表達(dá)量顯著增加。蛋白印記分析結(jié)果同樣表明在肉雞TD發(fā)生過程中CD147蛋白水平合成量減少，而在TD恢復(fù)期，CD147蛋白合成量增加。以上結(jié)果表明，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白降解障礙在肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良時(shí)起到有決定性的作用，而肉雞TD的恢復(fù)與CD147介導(dǎo)的肉雞細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的水解關(guān)系密切，這一結(jié)果與其他動(dòng)物的研究結(jié)果相近。
　　2.Hsp-90抑制劑對(duì)肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白降解的影響
　　本實(shí)驗(yàn)主要

4、研究Hsp-90抑制劑在肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良時(shí)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白降解的影響。實(shí)驗(yàn)用CD147、 MMP-2和MMP-9的基因表達(dá)量來反映細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解情況。用Hsp-90和血管內(nèi)皮生長因子VEGF及其受體Flk-1基因的表達(dá)量來反映血管的生成狀況。結(jié)果顯示，Hsp-90抑制劑引起血管生成因子Flk-1基因表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)福美雙誘導(dǎo)的肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良發(fā)病時(shí)生長板的恢復(fù)，跛行消失。此外，對(duì)TD肉雞給予Hsp-90抑制劑后CD147、M

5、MP-2和MMP-9的基因表達(dá)量均得到顯著恢復(fù)，這些變化提示Hsp-90抑制劑能有效的防治肉雞TD。在TD恢復(fù)期，Hsp-90抑制劑的應(yīng)用不僅增強(qiáng)了血管內(nèi)皮生長因子，還加速了細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解，從而促進(jìn)了生長板的恢復(fù)和跛行的緩和。以上結(jié)果揭示Hsp-90抑制劑與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解有密切的關(guān)系，Hsp-90抑制劑可以促進(jìn)血管生長和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解，從而使得發(fā)生脛骨軟骨發(fā)育不良的肉雞生長板得以恢復(fù)。
　　3.Hsp-90抑制劑

6、格爾德霉素對(duì)福美雙誘導(dǎo)的TD肉雞肝臟功能的影響
　　本實(shí)驗(yàn)主要研究Hsp-90抑制劑格爾德霉素(17-DMAG)對(duì)福美雙誘導(dǎo)的TD肉雞肝臟功能和抗毒性能力的影響。120只商品化的肉雞隨機(jī)分成三組:對(duì)照組、福美雙組和17-DMAG治療組。在喂養(yǎng)的第11天和14天，采血分離得到血清樣品，用于檢測肝臟丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)活性。實(shí)驗(yàn)同時(shí)提取各組雞的肝臟總蛋白，用以檢測超氧化物歧化

7、酶(SOD)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)活性。結(jié)果表明:福美雙組血清ALT、 AST和肝臟MDA水平升高，而血清ALP和肝臟抗氧化酶(SOD、GSH-Px)水平降低。而在17-DMAG治療組，這些指標(biāo)均得到有效恢復(fù)，濃度接近于對(duì)照組的水平。以上結(jié)果表明，17-DMAG能夠有效恢復(fù)和降低福美雙誘導(dǎo)的肉雞肝臟氧化損傷和毒性損害。
　　4.肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良發(fā)病期和恢復(fù)期Matrlin-3和Cyclin-Ⅰ基

8、因表達(dá)情況
　　Matrilin-3，是Matrilins家族中最小成員。在人類和小雞中表達(dá)有著很高的相似性。它能夠連接各種大分子并且提高軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的協(xié)同作用。Cyclin-Ⅰ，是細(xì)胞周期蛋白家族的一員，它能夠通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期素依賴性激酶活性，來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是研究肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良發(fā)病期和恢復(fù)期Matrilin-3和Cyclin-Ⅰ的基因表達(dá)情況。試驗(yàn)應(yīng)用熒光定量PCR檢測各組靶基因表達(dá)