3T3-L1細(xì)胞及小鼠子宮頸成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)和分化為脂肪細(xì)胞的研究.pdf

1、來源于胚胎時期中胚層的成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織內(nèi)主要細(xì)胞之一。其具有一定的分化能力，參與創(chuàng)傷修復(fù)、誘導(dǎo)成骨和成脂肪過程，并在一定條件下與纖維細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞可以相互轉(zhuǎn)化。脂肪組織作為內(nèi)分泌器官參與機(jī)體的的許多生理和病理過程。本課題的另一項研究已證明，分娩期山羊?qū)m頸中含有脂肪細(xì)胞，能夠分泌影響分娩期子宮頸成熟和分娩的前列腺素E2(PGE2)，但目前關(guān)于子宮頸中細(xì)胞的分化能力方面國內(nèi)外尚未報道。因此本實(shí)驗的目的就是驗證分娩期小鼠宮頸中是否也含

2、有脂肪細(xì)胞；體外分離和鑒定小鼠宮頸中的成纖維細(xì)胞，并對此細(xì)胞進(jìn)行分化脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)，以3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞的分化進(jìn)行形態(tài)對比觀察，以揭示宮頸中脂肪細(xì)胞的來源。
　　 本實(shí)驗以昆明小白鼠及3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞為研究對象。采集分娩時和分娩后小鼠宮頸樣本，制作冰凍切片并進(jìn)行油紅O染色；在無菌條件下取空懷小鼠子宮頸，采用組織外植塊培養(yǎng)的方法在含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行子宮頸細(xì)胞培養(yǎng)，利用不同細(xì)胞對胰蛋白酶消化的敏感度不

3、同以對子宮頸成纖維細(xì)胞進(jìn)行分離，通過細(xì)胞形態(tài)和波形蛋白抗體及角蛋白抗體的細(xì)胞免疫化學(xué)鑒定成纖維細(xì)胞；對3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、凍存及復(fù)蘇，并采用含有胰島素、地塞米松、IBMX以及羅格列酮的低血清濃度DMEM培養(yǎng)基對已分離的成纖維細(xì)胞以及已知的3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行前脂肪細(xì)胞或脂肪細(xì)胞的分化，通過細(xì)胞形態(tài)和油紅O染色進(jìn)行定性檢測。
　　 研究結(jié)果表明，分娩時小鼠子宮頸組織冰凍切片油紅O染色呈陽性，組織中含有前脂

4、肪細(xì)胞或脂肪細(xì)胞。培養(yǎng)的原代成纖維細(xì)胞沿著組織塊向外發(fā)散成長，形成細(xì)胞暈，細(xì)胞成梭形或多角形。分離的細(xì)胞用波形蛋白抗體及角蛋白抗體進(jìn)行熒光鑒定，波形蛋白鑒定呈陽性，角蛋白鑒定呈陰性，說明已成功分離出了成纖維細(xì)胞。在分化過程的第4天，即可觀察到少量細(xì)胞中含有油紅O陽性的脂肪滴，在第10天，細(xì)胞中開始出現(xiàn)的大脂肪滴聚集，這表明部分細(xì)胞已分化成為成熟脂肪細(xì)胞。對照組中3T3-L1小鼠成纖維細(xì)胞復(fù)蘇后的存活率為76％。在3T3-L1小鼠成纖維細(xì)