2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、在對(duì)家蠶蛹cDNA文庫(kù)測(cè)序分析中，發(fā)現(xiàn)一個(gè)編碼家蠶未知功能蛋白的cDNA序列，并將其命名為BmWZ。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，該cDNA序列全長(zhǎng)為50.bp，含有一個(gè)長(zhǎng)25.bp的開放閱讀框(ORF)，其編碼的蛋白質(zhì)為未知，全長(zhǎng)84個(gè)氨基酸殘基，預(yù)測(cè)其相對(duì)分子質(zhì)量為9 kD，等電點(diǎn)為4.54。PCR擴(kuò)增其ORF，回收產(chǎn)物經(jīng)Bam.I和Hin.III雙酶切后，克隆到融合表達(dá)載體pET-28a(+)相應(yīng)的酶切位點(diǎn)上，得到重組質(zhì)粒pET-28a(+

2、)-BmWZ。經(jīng)PCR、雙酶切鑒定以及測(cè)序證明重組正確。將構(gòu)建的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株感受態(tài)細(xì)胞，用終濃度為0 mM的IPTG誘導(dǎo)重組菌后，超聲裂解菌體作SDS-PAGE分析，在13 kD左右的位置有一條特異性蛋白條帶，與預(yù)期值(融合標(biāo)簽為3 kD，BmW.9 kD)相符，融合蛋白以包涵體形式存在。大量表達(dá)時(shí)用超聲裂解菌體分離并純化包涵體：對(duì)包涵體進(jìn)行溶解和梯度透析復(fù)性；采用親和層析純化His-BmWZ融合蛋白。以純

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