家蠶BmNADK基因的克隆分析及其與家蠶高溫應(yīng)激反應(yīng)的相關(guān)研究.pdf

1、NAD kinase(NADK)是唯一一個(gè)能夠從頭合成NADP+的酶,其能利用ATP,催化NAD+和NADH發(fā)生磷酸化,生成NADP+和NADPH。本文利用RT-PCR、qRT-PCR、RNAi和酶活的測(cè)定等技術(shù),研究BmNADK基因在家蠶自身氧化還原系統(tǒng)中的調(diào)控機(jī)制;進(jìn)一步探究了BmNADK基因在同一家蠶品種5齡的不同發(fā)育階段高溫應(yīng)激反應(yīng)表達(dá)機(jī)制和不同抗高溫家蠶品種的表達(dá)差異。主要研究?jī)?nèi)容包括：
　?、偶倚QNADK基因的克隆及其

2、會(huì)下調(diào)使得NADPH含量和GSH含量下降。利用RACE技術(shù),分別延伸NADK(SilkDB登錄號(hào)為BGIBMGA007449-TA)基因的5′及3′端序列,并獲得了NADK基因的cDNA序列,定位在3號(hào)染色體,與玉帶鳳蝶的基因進(jìn)化距離最近。本文還對(duì)家蠶5齡幼蟲(chóng)期NADK基因進(jìn)行了時(shí)空表達(dá)分析,發(fā)現(xiàn)其在搖擺期的表達(dá)量較高;我們選擇在搖擺期對(duì)其進(jìn)行RNAi實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,伴隨這 NADK基因表達(dá)量的下降,其搖擺期的時(shí)間會(huì)有所縮短;NADPH

3、、NAD+、NADH、NADP+的含量以及GSH和H2O2的含量調(diào)查發(fā)現(xiàn), NADPH的含量和GSH的含量下降,H2O2和NAD+的含量上升。說(shuō)明NADK基因參與到家蠶氧化還原系統(tǒng),主要是通過(guò)影響此系統(tǒng)中的NADPH、GSH等物質(zhì)的含量。
　　⑵家蠶NADK基因與高溫應(yīng)激存在關(guān)聯(lián)。以家蠶大造品種為材料進(jìn)行34℃高溫處理,分別調(diào)查了雌蠶和雄蠶的脂肪體、中腸、絲腺3個(gè)組織,結(jié)果顯示,隨著高溫處理時(shí)間增加,NADK基因表達(dá)量都有所上升,

4、雄蠶的組織中 NADK基因上調(diào)比雌蠶更為明顯,并且在脂肪體組織中上調(diào)最為顯著。為進(jìn)一步證明NADK基因的功能,我們選擇了42℃3h處理大造,仍然調(diào)查雌蠶和雄蠶的脂肪體、中腸、絲腺3個(gè)組織,結(jié)果表明42℃短時(shí)刺激使得 NADK基因的表達(dá)量顯著高于常溫組,這一現(xiàn)象在雄蠶和脂肪體中最為明顯,當(dāng)溫度恢復(fù)常溫時(shí),其表達(dá)量也會(huì)有所下降。說(shuō)明家蠶NADK基因和高溫是相關(guān)的。
　?、歉邷匾鸩煌垢邷仄贩N家蠶體內(nèi)NADK基因表達(dá)產(chǎn)生差異。以家蠶抗