大口黑鱸肌肉生長抑制素(MSTN)對肌肉生長作用的初步研究.pdf

1、肌肉生長抑制素(Myostatin，MSTN)是轉(zhuǎn)化生長因子β超家族的一員，是骨骼肌生長、分化的負(fù)調(diào)控因子，主要作用是抑制成肌細(xì)胞的增生與分化。深入研究MSTN基因在魚類肌肉生長發(fā)育過程中的作用機(jī)制，探索該基因在大口黑鱸養(yǎng)殖生產(chǎn)中的潛在應(yīng)用價值，不但是魚類肌肉生長分子調(diào)控機(jī)理中的重要內(nèi)容，也將為魚類的肉質(zhì)品質(zhì)改良研究提供理論依據(jù)。為了了解MSTN對大口黑鱸仔魚生長的影響，本實(shí)驗(yàn)將大口黑鱸(Micropterus salmoides)MS

2、TN成熟肽cDNA改造后克隆到pET32a(+)載體上，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá)。SDS-PAGE檢測表明表達(dá)的重組蛋白分子大小約28 kDa，含量為菌體總蛋白的34％。用純化后的蛋白免疫新西蘭兔，制備抗大口黑鱸MSTN的多克隆抗體，Western blot和ELISA檢測證實(shí)所獲得的抗體可與抗原蛋白特異性結(jié)合，抗體的效價為1:62500。將獲得的抗體顯微注射到大口黑鱸受精卵的卵黃區(qū)，以觀察MSTN失活后對魚對生長

3、造成的影響，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的仔魚生長比對照組加快。此外，進(jìn)行了肌肉中過量表達(dá)MSTN的研究。將大口黑鱸MSTN前肽基因定向克隆到pcDNA3.1(-)/mycHisB質(zhì)粒，構(gòu)建真核重組表達(dá)載體pcDNA3.1(-)/myc HisB-proMSTN。經(jīng)肌肉注射法將重組表達(dá)載體注入大口黑鱸背部肌肉，RT-PCR和免疫組化學(xué)確認(rèn)MSTN前肽基因已在肌肉組織中局部轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。本研究探討了在魚類肌肉中過量表達(dá)MSTN抗體和MSTN前肽對魚類肌肉