綿羊MSTN雙價納米抗體的制備及促肌肉生長功能研究.pdf

1、綿羊肌肉生長抑制素（MSTN)能夠負向調(diào)控肌肉生長，通過MSTN抗體阻斷其功能能夠促進肌肉生長。本研究利用已構(gòu)建綿羊MSTN納米抗體文庫，通過噬菌體展示技術(shù)淘選和篩選MSTN納米抗體基因，構(gòu)建綿羊MSTN雙價納米抗體，通過小鼠和綿羊?qū)嶒烌炞C其對肌肉促生長作用和功能，為進一步研發(fā)動物促進肌肉生長生物制劑奠定基礎(chǔ)。具體結(jié)果總結(jié)如下:
　　1、噬菌體文庫的淘選：對MSTN抗原蛋白進行原核表達和純化，利用ELISA原理淘選已構(gòu)建納米抗體文

2、庫，獲得1個納米抗體編碼基因，經(jīng)測序表明與前期篩選結(jié)果一致。
　　2、雙價綿羊MSTN納米抗體的表達與純化：將已獲得的綿羊MSTN納米抗體編碼基因通過接頭連接為雙價納米抗體基因片段，構(gòu)建重組原核表達載體在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達并純化，通過SDS-PAGE和Western Blot驗證表達蛋白反應(yīng)原性。大量表達和純化綿羊MSTN單價納米抗體與雙價納米抗體蛋白用于動物實驗。
　　3、綿羊MSTN納米抗體小鼠促肌肉生長動物實驗：挑選體

3、重均勻的昆明小鼠公鼠隨機分組，每組5只，將PBS、BSA蛋白、MSTN蛋白、綿羊MSTN單價納米抗體、綿羊MSTN雙價納米抗體分別注射小鼠右后肢腿部肌肉，PBS為對照組。每隔兩天注射并稱重記錄小鼠體重變化，取腿部長收肌制作切片，觀察肌肉纖維變化情況。結(jié)果表明，納米抗體組小鼠后肢肌肉體積明顯超過對照組，納米抗體組小鼠肌肉占全身比重顯著增加，且雙價組增重效果優(yōu)于單價組。肌肉組織學(xué)觀察（10×10倍鏡下，觀察相同面積內(nèi)肌肉纖維數(shù)量）表明綿羊M

4、STN納米抗體促進單位面積內(nèi)肌肉纖維數(shù)量增加。
　　小鼠促肌肉生長進一步驗證：將昆明小鼠公鼠隨機分為PBS、單價納米抗體、雙價納米抗體組，每組10只。注射部位同上，結(jié)果表明，雙價納米抗體組肌肉體積與重量顯著超過單價納米抗體組。
　　4、綿羊MSTN納米抗體綿羊促肌肉生長實驗：選取3月齡綿羊9只，隨機分為PBS組、單價納米抗體組、雙價納米抗體組，每組3只，每周右后肢注射2次并稱重，每次注射1mg。結(jié)果表明，雙價納米抗體組與單價

5、納米抗體組和PBS對照組增重效果差異不顯著。肌肉組織學(xué)觀察表明，雙價納米抗體組和單價納米抗體組肌肉纖維數(shù)量較PBS組增多，且差異顯著。
　　綜上所述，本研究成功構(gòu)建綿羊MSTN雙價納米抗體重組質(zhì)粒并在大腸桿菌中表達和純化，動物實驗表明綿羊MSTN納米抗體能夠增加小鼠的體重和單位面積肌肉纖維數(shù)量，對綿羊單位面積肌肉纖維數(shù)量也有促進作用，綿羊MSTN雙價納米抗體促進肌肉生長效果優(yōu)于單價納米抗體，雙價綿羊MSTN納米抗體的制備為研發(fā)動物