雙酚A抗體的制備及熒光偏振免疫分析研究.pdf

1、雙酚A(BPA)是一種環(huán)境類激素，具有一定的生物毒性，影響生態(tài)環(huán)境并威脅人類的安全健康。雙酚A可以導(dǎo)致嬰幼兒早熟、孕婦流產(chǎn)、前列腺癌等，影響人體的內(nèi)分泌系統(tǒng)，破壞DNA，也被認(rèn)為是一種內(nèi)分泌干擾物。然而雙酚A又是一種重要并應(yīng)用廣泛的有機(jī)化工原料，在生產(chǎn)和使用過程中，雙酚A會(huì)遷移到環(huán)境中，威脅人類健康。為了保障生態(tài)系統(tǒng)的安全和人類的健康，控制雙酚A在環(huán)境中的殘留，并建立雙酚A的快速檢測(cè)方法，顯得尤為重要。
　　本論文根據(jù)雙酚A的特定

2、結(jié)構(gòu)，選擇類似物雙酚酸BVA作為半抗原，偶聯(lián)牛血清白蛋白BSA，制備完全人工免疫抗原BVA-BSA，免疫Balb/c小鼠，制備免疫脾細(xì)胞，與體外培養(yǎng)的骨髓瘤SP2/0細(xì)胞融合，并經(jīng)過間接ELISA檢測(cè)篩選和有限稀釋法亞克隆，得到陽性雜交瘤細(xì)胞株，并注射到不完全佐劑致敏的Balb/c小鼠腹腔，制備小鼠腹水，即單克隆抗體。單抗經(jīng)過辛酸-硫酸銨法純化，SDS-PAGE以及間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法鑒定，得到高特異性高靈敏度的雙酚A單克隆抗體，并用

3、于分析檢測(cè)環(huán)境樣品中雙酚A殘留量。
　　熒光示蹤物是由熒光素與半抗原偶聯(lián)得到。本實(shí)驗(yàn)選擇三種熒光素(lysFITC、EDF、AMF)進(jìn)行制備熒光標(biāo)記物，其中l(wèi)ysFITC和EDF是由FITC衍生而來，三種熒光素與活化的雙酚酸的羧基結(jié)合，得到熒光素標(biāo)記物，并經(jīng)過TLC分離純化和FPIA鑒定，最終篩選出BVA-AMF為該實(shí)驗(yàn)的最佳熒光示蹤物，并用于建立熒光偏振免疫分析方法。
　　基于雙酚A單克隆抗體和熒光示蹤物成功制備的基礎(chǔ)上，

4、建立熒光偏振免疫分析法FPIA，用于檢測(cè)樣品中的雙酚A含量，檢測(cè)限為5.6ng/mL，IC50為140.6ng/mL，線性范圍為11.32-904.21ng/mL，相關(guān)系數(shù)R2=0.9913。并結(jié)合儀器方法HPLC和酶免方法ELISA對(duì)FPIA方法進(jìn)行驗(yàn)證，三種方法同時(shí)對(duì)環(huán)境水樣品做添加回收試驗(yàn)，F(xiàn)PIA的回收率為87.91-114.28％，HPLC法為85.40-104.18％，ELISA法為92.60-112.70％，F(xiàn)PIA法與H