有機磷農(nóng)藥熒光偏振及多殘留免疫分析研究.pdf

1、本文以研究建立快速檢測環(huán)境中有機磷農(nóng)藥殘留的熒光偏振免疫(FPIA)分析方法和多殘留酶聯(lián)免疫(ELISA)分析方法為目標(biāo),設(shè)計合成了三種不同類結(jié)構(gòu)的有機磷農(nóng)藥通用人工半抗原,并通過結(jié)合載體蛋白免疫動物獲得了三種分別抗二乙氧基磷酸基、含芳環(huán)(或雜環(huán))硫代磷酸基以及二乙氧基硫代磷酸并具一直鏈芳烴的有機磷農(nóng)藥的群特異性抗體。在所獲得抗體的基礎(chǔ)上,研究確立了二種檢測有機磷農(nóng)藥的FPIA分析方法以及三種有機磷農(nóng)藥多殘留ELISA分析方法。所建立的

2、方法為有機磷農(nóng)藥的快速多殘留檢測提供了技術(shù)手段,并具一定的使用價值和推廣應(yīng)用前景。主要研究結(jié)果如下:
　　1.確立二乙氧基磷乙酸(DEP)作為二乙氧基磷酸基團(tuán)的有機磷農(nóng)藥的通用半抗原,采用活性酯法制備人工免疫原(DEP-BSA),同時將DEP結(jié)合OVA得到包被原(DEP-OVA)。通過免疫動物獲得三種抗二乙氧基磷酸酯類有機磷農(nóng)藥的抗血清,分別為抗血清A、B、D。三種抗血清效價測定結(jié)果分別為1︰10000,1︰5000和1︰2000

3、0。以抗血清D研究有機磷農(nóng)藥ELISA檢測方法,確立最佳ELISA分析條件為:包被原濃度2μg/mL,Costar的酶標(biāo)板中4℃包被過夜,抗血清的工作稀釋度是1︰20000,抗原抗體的最佳反應(yīng)pH為7.0。親和性測定結(jié)果表明,其對二乙氧基磷酸基有機磷農(nóng)藥有較高的親和性,在此基礎(chǔ)上建立了此類有機磷農(nóng)藥的多殘留間接競爭ELISA方法,方法對對硫磷、嘧啶磷及敵敵畏三種農(nóng)藥在0.01～10μg/mL濃度之間具有良好的檢測效果,最小檢測限分別為1

4、2.5 ng/mL,11.6 ng/mL和48.3 ng/mL。該方法對水樣中對硫磷、嘧啶磷以及敵敵畏的添加平均回收率為106.0％~110.0%。
　　2.應(yīng)用上述抗對硫磷抗體A和抗體D以及熒光標(biāo)記物PM-B-EDF,研究確立了檢測對硫磷的FPIA分析方法。該方法對對硫磷的檢測范圍為0.1μg/mL~100μg/mL。檢測水樣中的對硫磷,平均回收率為104.0%~108.3%,最小檢測限為0.18μg/mL。應(yīng)用抗甲基谷硫磷抗體

5、MAb-Azi-110以及熒光標(biāo)記物MBP-EDF2,研究確立了檢測甲基谷硫磷的FPIA分析方法。該方法對甲基谷硫磷的檢測范圍為0.1～10μg/mL。檢測水樣中的甲基谷硫磷,平均回收率為96.1%~120.0%,最小檢測限為0.148μg/mL。
　　3.研究合成了含芳環(huán)(或雜環(huán))硫代有機磷農(nóng)藥的通用人工半抗原ArOP,通過重氮化法結(jié)合BSA獲人工免疫原ArOP-BSA,免疫動物獲得三種抗芳環(huán)(或雜環(huán))硫代類有機磷農(nóng)藥的群特異性

6、抗血清1、2、3,三種抗血清的效價分別為1︰40000、1︰80000和1︰40000?？寡宓挠H和性測定結(jié)果表明,其對芳環(huán)(或雜環(huán))硫代有機磷農(nóng)藥具有高度的親和性。以抗血清2建立的用于檢測此類有機磷農(nóng)藥的多殘留間接競爭ELISA分析方法,該方法對對硫磷及二嗪磷的檢測范圍為0.05μg/mL~10μg/mL,最小檢測限分別為0.023μg/mL和0.029μg/mL對水中的對硫磷及二嗪磷檢測,添加回收率為96.0%~106.4%。

7、>　　4.通過結(jié)合O,O-二乙基硫代磷酰氯和4-氨基丁酸合成二乙氧基硫代磷酸基團(tuán)并具一直鏈芳烴的有機磷農(nóng)藥的通用人工半抗原DENP,采用碳二亞胺法結(jié)合BSA獲得免疫原DENP-BSA,免疫動物獲得該類有機磷農(nóng)藥的群特異性抗血清,其效價為1︰50000?？寡宓挠H和性測定結(jié)果表明,其對二乙氧基硫代磷酸基團(tuán)并具一直鏈芳烴的有機磷農(nóng)藥具有高度的親和性。所建立用于檢測此類有機磷農(nóng)藥多殘留間接競爭ELISA分析方法,對內(nèi)吸磷和甲拌磷的檢測范圍為0