有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留酶聯(lián)免疫吸附分析方法的研究.pdf

1、本研究以建立環(huán)境中有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留的酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)方法為目標(biāo)，設(shè)計(jì)合成了有機(jī)磷農(nóng)藥通用半抗原，通過結(jié)合載體蛋白質(zhì)制備了通用人工抗原，免疫動(dòng)物獲得了抗多種有機(jī)磷農(nóng)藥的群特異性抗血清。在所獲得抗體的基礎(chǔ)上，建立了有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留ELISA方法。所建立的方法為有機(jī)磷農(nóng)藥的快速多殘留檢測(cè)提供了技術(shù)手段，具有一定的使用價(jià)值和推廣應(yīng)用前景。主要研究結(jié)果如下： 1.通過O,O-二乙基硫代磷酰氯和4-氨基丁酸反應(yīng)合成了有機(jī)磷農(nóng)藥

2、通用半抗原二乙基-N-(3-羧基丙基)硫逐磷酰胺酯（簡(jiǎn)稱DENP），并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。 2.采用碳二亞胺法將DENP與牛血清白蛋白（BSA）和雞卵清蛋白（OVA）進(jìn)行偶聯(lián)，制備了通用人工抗原DENP-BSA和包被原DENP-OVA。經(jīng)鑒定，結(jié)合比分別為12︰1和17：1。 3.將通用人工抗原DENP-BSA免疫兩只新西蘭大白兔，采血獲得了針對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的群特異性抗血清，效價(jià)分別1：102400和1：25600。

3、4.考察了9種有機(jī)磷農(nóng)藥與抗血清的親和性，發(fā)現(xiàn)與半抗原DENP結(jié)構(gòu)高度相似的甲拌磷、乙拌磷，內(nèi)吸磷與抗體的親和性最好；與DENP同樣含有直鏈烴結(jié)構(gòu)，但另一端為二甲氧基（硫代）磷酸酯的氧樂果和樂果與抗體的親和性次之；與DENP一樣含有二乙氧基硫代磷酸酯結(jié)構(gòu)，但另一端連接基團(tuán)為芳環(huán)或雜環(huán)的辛硫磷、二嗪農(nóng)、喹硫磷及毒死蜱和抗體的親和性較弱。 5.建立了用于檢測(cè)甲拌磷、內(nèi)吸磷的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線，檢測(cè)限分別為0.0037m