幾種典型環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的酶聯(lián)免疫吸附分析方法研究.pdf

1、環(huán)境內(nèi)分泌干擾物是指由于人類的生產(chǎn)和生活活動而釋放到環(huán)境中的、對人體內(nèi)和動物體內(nèi)原本營造的正常激素功能施加影響，從而影響內(nèi)分泌系統(tǒng)的化學(xué)物質(zhì)作用的物質(zhì)，又稱為“環(huán)境激素”。它是一類對生物體有害的化學(xué)物質(zhì)，具有類似雌激素的作用，暴露到環(huán)境中可導(dǎo)致動物和人體的性激素分泌量及活性下降，精子數(shù)量減少，生殖器官異常，癌癥等疾病的發(fā)病率增加，并使生殖能力降低，同時(shí)還影響到各種生物的免疫和神經(jīng)系統(tǒng)，也可導(dǎo)致生物基因突變等。環(huán)境內(nèi)分泌干擾物問題已經(jīng)成為

2、繼溫室效應(yīng)、臭氧層破壞之后的第三大環(huán)境問題，對其篩選及檢測方法的研究是國際上環(huán)境科學(xué)的研究前沿和熱點(diǎn)之一。
　　 本文主要研究了測定環(huán)境中萘(NA)、4，4'-二溴聯(lián)苯(PBB15)、3，4-二氯聯(lián)苯(PCB12)的酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)新方法，同時(shí)與傳統(tǒng)的經(jīng)典的色譜法--高效液相色譜檢測結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 本文主要研究成果簡述如下：

3、>　　 (1)利用本組制備的抗DNA多克隆抗體和人工包被原，優(yōu)化ELISA相關(guān)反應(yīng)條件后，如PBS的pH值、NaCl濃度、甲醇含量、洗滌液、封閉液、酶標(biāo)二抗的稀釋倍數(shù)等，建立了測定NA的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法，其線性范圍為10-3-10μg/L，檢出限IC20為0.25ng/L，并將該法用于測定東華大學(xué)鏡月湖湖水、學(xué)校生活區(qū)噴泉水和蘇州河河水中NA的含量，回收實(shí)驗(yàn)顯示回收率在87％～107％之間。這種方法靈敏度高、選擇性好、線性

4、范圍寬，效果理想。同時(shí)用上述經(jīng)優(yōu)化的間接競爭ELISA法檢測印染廢水處理廠底泥中NA的含量，并與高效液相色譜檢測結(jié)果作相關(guān)性分析，得出兩者相關(guān)系數(shù)為0.9867，可見兩種方法的檢測結(jié)果數(shù)值比較接近。
　　 (2)利用本組制備的PBB15多克隆抗體和自己制備的PBB15人工包被原，優(yōu)化相關(guān)反應(yīng)條件后，如PBS的pH值、NaCl濃度、甲醇含量、洗滌液、封閉液、酶標(biāo)二抗的稀釋倍數(shù)等，建立了測定PBB15的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法，

5、其線性范圍在10-2-102μg/L，檢測限IC20為0.02μg/L，并將該法用于測定東華大學(xué)鏡月湖湖水、學(xué)校生活區(qū)噴泉水和蘇州河河水中的PBB15，回收實(shí)驗(yàn)表明回收率在97％～147％之間，同時(shí)用上述經(jīng)優(yōu)化的間接競爭ELISA法測定印染廢水處理廠底泥中PBB15的含量，并與高效液相色譜檢測結(jié)果作相關(guān)性分析，得出兩者相關(guān)系數(shù)為0.9048。
　　 (3)利用本組制備的PCB12多克隆抗體和自己制備的PCB12人工包被原，經(jīng)測定

6、，其抗體效價(jià)為100，優(yōu)化ELISA相關(guān)反應(yīng)條件后，如PBS的pH值、NaCl濃度、甲醇含量、洗滌液、封閉液、酶標(biāo)二抗的稀釋倍數(shù)等，建立了測定PCB12的間接競爭ELISA方法，其線性范圍在10-2-102μg/L，檢測限IC20為4.04 ng/L，并將該法用于測定茶葉中PCB12的含量，回收率在95％～113％之間，同時(shí)用高效液相色譜檢測茶葉中PCB12含量，將兩者結(jié)果做相關(guān)性分析，得出相關(guān)系數(shù)為0.9894，可見ELISA的檢測結(jié)