酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)磺胺對(duì)甲氧嘧啶殘留的研究.pdf

1、該論文開展了這方面的初步研究工作,以期探討測(cè)定SMD殘留的靈敏、快速、方便的檢測(cè)方法,為科學(xué)研究與實(shí)際應(yīng)用提供資料.用戊二醛法將SMD與載體蛋白BSA偶聯(lián)制備合成抗原SMD-BSA用作免疫原,同法合成包被抗原SMD-OVA,選擇幾種免疫程序,免疫健康家兔,篩選最佳免疫程序,獲得抗血清,用雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)抗血清進(jìn)行定性測(cè)定,結(jié)果表明抗血清特異性針對(duì)SMD.用ELISA法對(duì)抗血清進(jìn)行定量測(cè)定抗血清之效價(jià),其效價(jià)為1:2560,同時(shí),用EL

2、ISA試驗(yàn)對(duì)抗血清進(jìn)行了鑒定,分別以O(shè)VA、SMD-OVA、BSA、SMD-BSA進(jìn)行包被,結(jié)果抗血清對(duì)OVA包被孔吸光值較低,而對(duì)SMD-OVA包被孔吸光值較高,表明抗血清中的確存在抗SMD抗體,結(jié)果與瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的結(jié)果一致.以上結(jié)果表明所獲得的抗血清符合要求,能用于實(shí)際樣品的檢測(cè).用所制備的抗血清建立間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法.優(yōu)選了ELISA的工作條件,方陣測(cè)定確定了包被抗原最佳包被濃度(50μg/mL),抗血清最佳稀釋度(1:100

3、),酶標(biāo)抗體的最適工作稀釋度(1:500),并建立了ELISA標(biāo)準(zhǔn)工作曲線.工作曲線表明在10~2000μg/L濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,超過2000μg/L則線性關(guān)系不好.該法檢測(cè)底限為63μg/L,低于國際規(guī)定殘留限量(100μg/kg)和國內(nèi)規(guī)定殘留限量(300μg/kg)的要求.按建立的ELISA方法測(cè)定了方法的回收率,結(jié)果表明回收率較好,符合預(yù)期效果.建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的精確度以批內(nèi)誤差和批間誤差來表示.該試驗(yàn)批內(nèi)