牛肌肉衛(wèi)星細胞中抑制MSTN表達后對脂肪代謝相關(guān)基因的影響.pdf

1、肌肉生長抑制素(myostatin，MSTN)屬于轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factorβ，TGF-β)超家族成員，在骨骼肌中高表達。眾多研究表明，敲除MSTN后，肌肉質(zhì)量顯著增大，脂肪含量變少。但抑制MSTN表達后，如何影響脂肪沉積的過程，尚未研究清楚。
　　本研究利用反義RNA技術(shù)，成功構(gòu)建了雙向表達載體pMSTN-CMV-CAG-antiMSTN，并通過Western blot篩選出抑制效果最佳

2、的MSTN的反義載體。將最佳antiMSTN載體，RNAi926干擾載體，過表達MSTN載體分別轉(zhuǎn)染牛肌肉衛(wèi)星細胞48h后，Real-timePCR檢測10種脂肪酸相關(guān)基因相對表達量。結(jié)果顯示，抑制MSTN表達后，脂肪合成相關(guān)基因:FASN(2.29，p＜0.05)、ACC(2.19，p＜0.01)、SCD-1(1.29，p＜0.05)的表達量均上調(diào);脂肪酸氧化相關(guān)基因:CPTI-B(4.68，p＜0.01)、ACOX-1(1.66，p

3、＜0.01)的表達量上調(diào)，ECHDC1(0.83，p＜0.05)的表達量下調(diào);脂肪分解相關(guān)基因:PPARg(2.26，p＜0.01)、LIPE(2.05，p＜0.01)的表達量上調(diào)，LPL(0.79，p＜0.01)的表達量下調(diào);脂肪轉(zhuǎn)運基因:FATP(1.04，p＞0.05)表達量不變，無顯著性差異。總體來說，脂肪氧化和分解的變化(12.27)大于脂肪合成(5.77)。在牛肌肉衛(wèi)星細胞和轉(zhuǎn)基因小鼠個體中，利用RNA干擾技術(shù)抑制MSTN表

4、達后，脂肪合成和降解相關(guān)基因表達結(jié)果與此有一致的表達趨勢。在牛肌肉衛(wèi)星細胞中，過表達MSTN，脂肪合成相關(guān)基因表達也有提升，但脂肪氧化和分解也大于脂肪合成，只是低于抑制結(jié)果的變化幅度。上述結(jié)果提示：⑴在牛肌肉衛(wèi)星細胞中，利用反義RNA(M3)抑制MSTN表達，可以得到與RNA干擾技術(shù)同樣的抑制靶基因表達的效果。⑵在牛肌肉衛(wèi)星細胞和轉(zhuǎn)基因鼠中MSTN敲減或過表達后脂肪相關(guān)基因的表達均顯示從脂肪合成與脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移動。⑶抑制