鵪鶉胚胎早期PGCs遷移規(guī)律以及性腺發(fā)育的研究.pdf

1、本課題對鵪鶉原始生殖細胞(primordial germ cells，PGCs)的發(fā)生、遷移及性腺的分化和發(fā)育規(guī)律，在顯微水平上進行了全面而系統(tǒng)的研究。試驗的主要結果如下： 1.采用免疫組化的方法追蹤鵪鶉胚胎早期PGCs發(fā)生和遷移的過程，染色結果觀察顯示，鵪鶉PGCs在未孵化期幾乎都分布在胚盤暗區(qū)，主要在與明區(qū)相交界的部位，有分離的細胞也有成對存在的。孵化12h的胚盤，PGCs大多數(shù)位于明區(qū)，緊靠明暗交界區(qū)域，并有三個聚在一起出

2、現(xiàn)的。孵化19h的胚盤，PGCs集中分布于胚體頭前側部的明區(qū)中，即生殖新月區(qū)。未分化期時的PGCs數(shù)為2～3個，到原條期已增至100多個，亦為PGCs的增殖高峰期。而在一體節(jié)之后，PGCs群落分布趨向于血管網(wǎng)的形成區(qū)域。孵化27h，已有少量PGCs分布于明區(qū)的血管中。到孵化36h時，有大量的的PGCs聚集在明區(qū)血管網(wǎng)中，左右兩側都有，PGCs數(shù)目為檢測各個時期最多。孵化45h時，從頭部到臍腸系膜PGCs均有散在和聚團分布，并主要聚集在頭

3、部間充質(zhì)的血管中。 2.在對鵪鶉胚胎期性腺分化時間的研究中，觀察到，孵化第4d，PGCs已經(jīng)遷移到原始性腺內(nèi)，并與其一起形成未分化的性腺。在孵化第5d時，性腺開始顯現(xiàn)出卵巢和睪丸的特征。卵巢分化時可以明顯觀察到性腺上皮有一層PGCs大小樣的細胞層，其與下層明顯分為兩部分，即致密的皮質(zhì)層和疏松的髓質(zhì)層；精巢分化時，上皮下為幾層間充質(zhì)細胞形成的早期白膜，使實質(zhì)內(nèi)細胞團與上皮分開，實質(zhì)內(nèi)的細胞團索有向早期曲精細管索發(fā)育的趨向。因此在組

4、織學水平上，孵化第5d即為鵪鶉胚胎性腺分化的時間。 3.通過組織學方法觀察鵪鶉胚胎各期睪丸的組織結構特征，研究睪丸的發(fā)育規(guī)律。結果表明：孵化第7～9d，睪丸的形態(tài)特征逐漸明顯；孵化第10d，睪丸索形成并且PGCs分化為精原細胞；孵化第12d，精原細胞呈葡萄狀或鏈狀分布在曲精細管內(nèi)，并有少量的成熟型間質(zhì)細胞和血管填充于管腔之間；孵化第15d時，曲細精管明顯變粗、數(shù)量增多，精原細胞進入有絲分裂而迅速增殖；到孵化結束第17d時，睪丸的

5、形態(tài)趨于成熟，曲精細管清晰可辨，大量的間質(zhì)細胞、結締組織和血管填充于管腔內(nèi)。 4.對鵪鶉胚胎期卵巢的連續(xù)切片進行H.E染色，結果觀察到：孵化第7d，右側卵巢開始慢慢退化，極少數(shù)PGCs開始分化為卵原細胞；孵化10 d，卵巢明顯區(qū)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)部分，皮質(zhì)部外區(qū)分布有大量增殖的卵原細胞群，呈合胞體結構；孵化11 d，卵原細胞數(shù)量增加，皮質(zhì)部逐漸變厚，髓質(zhì)部變?。环趸?3 d，卵巢皮質(zhì)部開始出現(xiàn)早期的原始卵泡；孵化14 d，卵巢皮質(zhì)部

6、出現(xiàn)大量原始卵泡，數(shù)量逐漸增多；孵化第17和出雛1d時，卵巢的形態(tài)趨于成熟，觀察到初級卵泡和次級卵泡，卵泡形態(tài)清晰，數(shù)量較多，卵泡間基質(zhì)豐富，髓質(zhì)中充滿血管。 5.對于目前熱點研究中的轉基因技術，家禽中比較集中于雞，鵪鶉作為實驗動物的優(yōu)點，是本實驗選取其作為實驗素材的原因。填補此空白并想在鵪鶉上進行相關轉基因技術和胚胎干細胞技術，就必須對早期胚胎在體內(nèi)發(fā)育的基本理論進行了解，系統(tǒng)的描述早期PGCs的起源、遷移和增殖規(guī)律，以及性腺