濕地松離體器官發(fā)生及其解剖學與內(nèi)源激素變化研究.pdf

1、濕地松是我國南方主要的綠化及造林樹種，近年來由于林業(yè)需求量逐漸增大，通過組培快繁技術(shù)手段無疑是短期育苗周期的有效途徑。因此，本研究以成熟合子胚為材料，進行如下研究：①通過直接器官發(fā)生途徑進行芽苗增殖的研究，建立再生體系；②進行愈傷組織培養(yǎng)及其分化研究；③進行愈傷組織培養(yǎng)及其分化過程的解剖學觀察：④利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定濕地松不定芽增殖過程中內(nèi)源激素的變化。主要研究結(jié)果如下： 1濕地松不定芽增殖培養(yǎng) 以濕地松

2、無菌苗帶子葉頂芽為外植體，誘導濕地松不定芽的形成。試驗研究了基本培養(yǎng)基、激素水平、有機添加物等因素對濕地松不定芽增殖的影響，探索濕地松不定芽增殖培養(yǎng)的關(guān)鍵技術(shù)及其主要影響因素。結(jié)果表明：DP+6-BA4.00 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1為不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基。培養(yǎng)基附加10 g·L-1肌醇或300 mL·L-1椰子汁對不定芽增殖均有一定的增效作用。 2濕地松愈傷組織培養(yǎng)、不定芽分化及其解剖學觀察 以成熟

3、種胚、實生無菌苗的帶子葉頂芽、下胚軸和胚根作為外植體，進行愈傷組織的誘導、增殖及分化，試驗結(jié)果表明：成熟離體胚是濕地松愈傷組織誘導的最佳外植體，愈傷組織培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基為TX+NAA1.0 mg·L-1+6-BA0.3 mg·L-1和TX+2，4-D2.0 mg·L-1+NAA0-5 mg·L-1+6-BA2.0 mg·L-1，對愈傷組織的誘導、增殖及分化的效果均較好，二者交替使用，能分化出不定芽的愈傷組織數(shù)目較多。培養(yǎng)基中添加Ve0.

4、05 g·L-1或PVP1.00 g·L-1，或縮短繼代周期，能在一定程度上減輕褐化。愈傷組織培養(yǎng)的不同階段，對光照的需求有所不同。經(jīng)愈傷組織再生的不定芽成活率較低，伸長生長困難。 同時，以濕地松愈傷組織培養(yǎng)及分化階段得到的愈傷組織為材料，進行組織細胞學的觀察研究。觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)：不同顏色及質(zhì)地的愈傷組織，組織細胞結(jié)構(gòu)存在一定差異，只有白色緊實型愈傷組織存在潛在的器官發(fā)生能力。愈傷組織起源于薄壁細胞，隨著細胞的不斷分裂與增殖，在愈

5、傷組織的近表層處開始出現(xiàn)“擬分生組織”，這是器官性愈傷組織的重要標志。從愈傷組織分化過程的切片觀察發(fā)現(xiàn)，濕地松愈傷組織不定芽分化屬于外起源。 3濕地松芽苗不定根誘導 采用固-液雙層培養(yǎng)法，對濕地松單株芽苗進行不定根誘導試驗。試驗結(jié)果表明：該方法可有效抑制切口處愈傷組織的形成，生根率較高的處理及基本培養(yǎng)基為在20d添加液體大量元素的1/2DCR。用珍珠巖和蛭石取代瓊脂作為基質(zhì)，雖然生根芽苗長勢良好，能夠節(jié)約成本，但生根率較

6、低。生根培養(yǎng)基中添加ABT，對濕地松不定根誘導效果不顯著。 4濕地松芽苗增殖過程內(nèi)源激素變化 試驗以濕地松實生無菌苗帶子葉頂芽為外植體誘導不定芽，采用連續(xù)添加6-BA或隔代添加6-BA的培養(yǎng)方式，進行不定芽增殖試驗，并在各個增殖培養(yǎng)階段取材，進行內(nèi)源激素的提取與測定(ELISA法)。試驗結(jié)果表明：隨著增殖代數(shù)的增加，連續(xù)添加6-BA，增殖系數(shù)呈下降趨勢，而隔代添加6-BA，其增殖系數(shù)呈波浪式升降變化。兩種增殖方法，其內(nèi)源