常用內(nèi)參基因在小鼠乳腺、肝臟、小腸組織中表達穩(wěn)定性比較.pdf

1、本試驗由三部分組成，主要研究了不同泌乳期小鼠乳腺組織、經(jīng)過不同免疫處理的小鼠肝臟組織以及幼齡小鼠成長過程中小腸組織內(nèi)參基因的穩(wěn)定性。應用熒光實時定量PCR檢測基因B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP的表達水平，并應用geNorm程序進行分析，最終選出合適的內(nèi)參基因，為研究目標基因的表達奠定基礎。 試驗一：實時定量PCR(qPCR)是檢測細胞和組織中mRNA表達量最常用的技術之一，而使用qPCR要求對數(shù)據(jù)進

2、行標準化。在本試驗中通過qPCR研究六個潛在內(nèi)參基因(B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP)在不同泌乳期小鼠乳腺組織中的表達情況。經(jīng)過SAS6.12中ANOVA模型進行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明B2M差異顯著(P<0.05)。經(jīng)過geNorm程序分析，所選內(nèi)參基因穩(wěn)定性從高到低排序分別是GAPDH/HPRT1，ARBP，ACTB，SDHA，B2M。由此推薦應用基因GAPDH和HPRT1作為實時定量PCR不同泌乳期小鼠乳腺

3、組織的內(nèi)參照。 試驗二：目前實時定量PCR技術已廣泛應用于細胞或組織mRNA的轉(zhuǎn)錄水平的檢測和定量。選擇合適的內(nèi)參基因可以消除不同標本在RNA的產(chǎn)量、質(zhì)量以及逆轉(zhuǎn)錄效率上可能存在的差別，從而獲得目標基因特異性表達的真正差異。本試驗應用實時定量PCR技術，研究小鼠在經(jīng)過免疫刺激后，B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP共6個內(nèi)參基因在肝臟組織中的表達情況。結(jié)果表明，這6個內(nèi)參基因表達存在差異。經(jīng)過geNorm

4、程序統(tǒng)計學分析，確定了ACTB，GAPDH兩個看家基因適用于校正目標基因的表達量，為研究小鼠免疫刺激后肝臟目標基因的表達奠定基礎。 試驗三：內(nèi)參基因常用于實時定量PCR檢測mRNA表達水平的校正和標準化，但是內(nèi)參基因表達受生理階段、組織或細胞以及實驗條件的影響。因此，本試驗選擇B2M，ACTB，GAPDH，SDHA，HPRT1和ARBP共6個內(nèi)參基因，研究其在幼齡小鼠小腸組織內(nèi)的表達情況。經(jīng)過geNorm程序和NormFinde