山豆根多糖提取工藝及免疫學(xué)活性研究.pdf

1、山豆根為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有多方面的藥理作用和生物活性。本論文進(jìn)行了山豆根多糖（SSP）的分離提取，優(yōu)化了提取工藝路線，制定出了山豆根多糖原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究探討了山豆根多糖的藥理活性及其作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 微波提取法確定山豆根粗多糖的最佳提取條件為：料液比1:15，提取溫度90℃，提取時(shí)間90 min，上述條件下山豆根粗多糖得率為5.54％，總糖含量為65.41％，精制后的多糖中總糖含量達(dá)88.48％。

2、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面，單糖含量、干燥失重、重金屬含量、蛋白質(zhì)含量等均符合《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定，精制后的多糖采用紅外光譜掃描表現(xiàn)出多糖的特征吸收峰。觀察了不同劑量的山豆根多糖對(duì)小鼠免疫器官組織中自由基及自由基產(chǎn)生酶活性的影響，探討了山豆根多糖的自由基藥理作用及抗氧化作用。利用地塞米松（Dex）建立免疫抑制模型，觀察了山豆根多糖對(duì)免疫功能低下小鼠血清溶菌酶（LZM），白介素-6（IL-6），白介素-10（IL-10），白介素-12（IL-12

3、），干擾素-γ（IFN-γ）含量的影響。采用體外培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的方法，觀察了山豆根多糖對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分泌白介素-4（IL-4）和干擾素-γ（IFN-γ）的影響。觀察了不同劑量的山豆根多糖對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷和環(huán)磷酸鳥苷（cAMP/cGMP）水平及分泌6-酮-前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）、血栓素B2（TXB2）和一氧化氮（NO）的影響，探討山豆根多糖對(duì)雞免疫細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)分子的調(diào)節(jié)作用。以不同劑量的山豆根

4、多糖給雞一次性胸部肌肉注射，觀察了不同時(shí)間段雞體內(nèi)活性氧水平及抗氧化能力。
　　 結(jié)果：表明：地塞米松按劑量1.25 mg/kg體重于1d、3d、5d皮下注射能引起小鼠免疫功能顯著下降，復(fù)制出免疫功能低下模型。山豆根多糖能拮抗由地塞米松所引起的小鼠脾臟指數(shù)的下降，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；山豆根多糖通過(guò)提高機(jī)體免疫器官抑制羥自由基能力，降低髓過(guò)氧化物酶活性、抑制黃嘌呤氧化酶的活性等途徑來(lái)影響機(jī)體內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生與消除，并通過(guò)升高還原

5、型谷胱甘肽水平、增強(qiáng)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性而調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化還原平衡。山豆根多糖能夠增加小鼠血清中溶菌酶的含量，增強(qiáng)機(jī)體的抗菌能力，通過(guò)調(diào)節(jié)白IL-6、IL-10和IL-12來(lái)影響機(jī)體的免疫功能。山豆根多糖對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子IL-4及IFN-γ的含量無(wú)顯著影響，故其對(duì)Th1/Th2細(xì)胞之間的免疫平衡影響不顯著，但在有ConA存在的條件下，山豆根多糖可協(xié)同ConA使IFN-γ含量顯著上升，使得Th1/Th2增加，從而

6、增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)和抗病毒活性，達(dá)到免疫調(diào)節(jié)的作用。山豆根多糖在體外能顯著升高雞脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP水平、促進(jìn)6-keto-PGF1a和TXB2分泌，調(diào)節(jié)雞脾臟淋巴細(xì)胞cAMP/cGMP和6-keto-PGF1a/TXB2信號(hào)體系。山豆根多糖對(duì)雞胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)均有升高作用，并通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體總抗氧化能力、超氧化物歧化酶活力、還原型谷胱甘肽和一氧化氮的水平從而影響雞的抗氧化能力和免疫功能。
　　 結(jié)論：
　

7、　 （1）山豆根多糖提取方法以微波法較好，最適條件為料液比1:15，提取溫度90℃，提取時(shí)間90 min。建立了山豆根多糖的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　 （2）山豆根多糖通過(guò)影響小鼠體內(nèi)活性氧水平及其相關(guān)酶的活性，調(diào)節(jié)機(jī)體的抗氧化能力。
　　 （3）山豆根多糖通過(guò)升高小鼠血清中溶菌酶的水平，調(diào)節(jié)淋巴因子水平影響機(jī)體的免疫功能。
　　 （4）山豆根多糖協(xié)同ConA使IFN-γ含量顯著上升，從而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)活性。