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文檔簡(jiǎn)介
1、豬繁殖與呼吸綜合癥是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的傳染病。PRRSV含有8個(gè)開(kāi)放閱讀框,其中GP5蛋白(EP)和膜蛋白(MP)具有很強(qiáng)的免疫原性,一直是重組疫苗的研究熱點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)利用復(fù)制缺陷型腺病毒載體首次成功構(gòu)建了同時(shí)攜有EP和MP的重組腺病毒。在構(gòu)建重組腺病毒的試驗(yàn)
2、中,首先用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法分別擴(kuò)增出豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5和ORF6,將ORF5和ORF6用口蹄疫病毒2A序列串聯(lián),再將連接好的E+2A+M基因亞克隆入腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV,經(jīng)篩選獲得了重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV/E+2A+M;然后在大腸桿菌BJ5183內(nèi)將此重組穿梭質(zhì)粒和腺病毒骨架載體pAdEasy進(jìn)行同源重組,獲得了插有外源基因的重組腺病毒質(zhì)粒pAd/E+2A+M;最后,經(jīng)
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