馬鏈球菌獸疫亞種ATCC35246株免疫蛋白組學(xué)研究.pdf

1、馬鏈球菌獸疫亞種（Streptococcusequissp.zooepidemicus）屬于蘭氏分群的C群鏈球菌，是我國豬鏈球菌病的主要病原。主要引起豬的腦膜炎、敗血癥、關(guān)節(jié)炎及突發(fā)性死亡，現(xiàn)有滅活疫苗和弱毒活疫苗的免疫效果存在不足；所以，發(fā)掘新的免疫原是研制新型亞單位疫苗的當務(wù)之急。
　　 本試驗分別提取馬鏈球菌獸疫亞種ATCC35246株的胞外蛋白（extracellularproteins，EP）、胞膜相關(guān)蛋白（membr

2、ane-associatedproteins，MAP）和胞壁相關(guān)蛋白（cellwall-associatedproteins，CWP），采用免疫蛋白組學(xué)的方法，以微型定遠豬的ATCC35246康復(fù)血清作為一抗，辣根過氧化物酶標記的葡萄球菌蛋白A（HRP-SPA）為二抗，鑒定具有免疫原性的蛋白。將重復(fù)膠上與之對應(yīng)的蛋白點進行飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）或串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOF-MS），并進行肽指紋圖譜分析

3、。最后，一共有8個胞外蛋白、11個膜相關(guān)蛋白和13個胞壁相關(guān)蛋白被成功鑒定出來。BLAST結(jié)果（www.sanger.ac.uk）顯示所有成功鑒定的蛋白對應(yīng)核酸序列與馬鏈球菌獸疫亞種具有很高的同源性（≥61％），除AE6（UDP-氮乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶）、AE7（UDP葡萄糖焦磷酸化酶）外的所有鑒定蛋白在馬鏈球菌獸疫亞種中均為第一次報道。
　　 為了檢測這些蛋白對應(yīng)基因片段在豬源鏈球菌不同中國分離株中的分布狀況，從而進一步確定

4、疫苗候選抗原靶分子提供依據(jù)，我們選擇了同源性大于等于60％的蛋白，然后根據(jù)Sanger中心公布的SEZ序列設(shè)計并合成引物、進行PCR檢測。
　　 比較弱毒株ST171和強毒株ATCC35246的結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)AE4（3-磷酸甘油醛脫氫酶）、AM1（黃素單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶）、AM8（DNA導(dǎo)向RNA聚合酶a亞單位）和AC11（丙酮酸激酶）這四對引物僅在強毒株中被檢測到，這預(yù)示這四個蛋白與ATCC35246的毒力因子有關(guān)。更讓我們