柑橘酸腐病菌的致病機理及其拮抗酵母的研究.pdf

1、柑橘酸腐病菌Geotrichum citri-aurantii是重要的采后病原真菌，常會導(dǎo)致果實的嚴(yán)重腐爛和重大的經(jīng)濟損失。從自然發(fā)病的柑橘果實上分離柑橘酸腐病菌，并對其進行鑒定。采用菌絲生長速率法，測定酸腐病菌對3種常用藥劑的敏感性。利用掃描電鏡觀察其在果實上的侵染過程。從產(chǎn)生的細胞壁降解酶、有機酸和毒素等方面，對酸腐病菌的致病機理進行初步研究。采用紫外可見分光光度法，測定離體(invitro)和活體(in vivo)條件下病菌產(chǎn)生的

2、細胞壁降解酶活性。利用HPLC測定病菌產(chǎn)生的有機酸的種類。通過有機溶劑萃取和(NH4)2SO4沉淀，從病菌發(fā)酵濾液中提取毒素，活體上測定其生物活性。通過in vitro和in vivo篩選，獲得對酸腐病菌有明顯抑制作用的酵母菌株Wf-b-1。Wf-b-1為已知的酵母菌株，經(jīng)實驗室鑒定為球有孢圓酵母Torulaspora globosa，并從不同接種濃度、不同接種時間和酵母在果實傷口處的生長動態(tài)等方面，對其抑制效果進行評價。主要的研究結(jié)果

3、如下：
　　 1.經(jīng)分離、純化獲得7株柑橘酸腐病菌，并通過形態(tài)學(xué)特征、果實發(fā)病癥狀和rDNA-ITS序列分析對其進行鑒定，并構(gòu)建基于rDNA-ITS的系統(tǒng)進化樹，發(fā)現(xiàn)其與Geotrichum citri-aurantii親緣關(guān)系更近。
　　 2.藥敏感性測定顯示，酸腐病菌對雙胍鹽極敏感，EC50低于90μg/L，而對咪鮮胺和抑霉唑不敏感，兩者的EC50在20000-60000μg/L之間。
　　 3.掃描電鏡觀察

4、其在果實上的侵染過程，發(fā)現(xiàn)孢子附著在果實表面，6h之內(nèi)孢子萌發(fā)長出芽管，菌絲向傷口處趨向生長。在缺乏營養(yǎng)的條件下，36h之內(nèi)菌絲斷裂即可形成節(jié)孢子。同時發(fā)現(xiàn)病菌不通過氣孔侵染果實。
　　 4.對其致病機理進行初步研究，發(fā)現(xiàn)酸腐病菌在離體和活體培養(yǎng)條件下，均可產(chǎn)生兩種活性較高的胞壁降解酶PG和PMG，在果實發(fā)病部位PG的最高酶活出現(xiàn)在84h，PMG最高酶活出現(xiàn)在60h，說明其在致病過程中起重要作用；研究其產(chǎn)生的酸堿物質(zhì)發(fā)現(xiàn)，活體接

5、種可導(dǎo)致腐爛果實pH的明顯降低，酸腐病菌在離體培養(yǎng)和活體接種培養(yǎng)條件下都可產(chǎn)生有機酸，果實發(fā)病部位檢測到葡萄糖酸的存在；研究其致病毒素發(fā)現(xiàn)，粗毒素大部分存在于水相中，為極性高的化合物。
　　 5.篩選到對酸腐病菌有明顯抑制作用的酵母菌株Wf-b-1。評價其對酸腐病的抑制效果，發(fā)現(xiàn)Wf-b-1的懸浮液濃度高于病原菌孢子濃度(1×106spores/mL)時，抑制效果較好；Wf-b-1同時或先于病原菌接種，才能達到抑制效果；在有病原