以GBSS、SSⅢ、SSⅡ基因為靶標的RNAi載體對馬鈴薯的轉化及鑒定.pdf

1、馬鈴薯（Solanum tuberosum L．）淀粉在食品和化工領域都有廣泛的應用價值，而淀粉的糊化特性和凝沉性成為其應用的重要參考指標。目前，生產上推廣的馬鈴薯品種，其淀粉糊化溫度和凍融穩(wěn)定性都不理想。隨著淀粉生物合成途徑中各種相關酶代謝途徑及機理的深入研究，利用基因工程技術調控作物淀粉合成過程中相關酶基因的表達，從而使降低淀粉糊化溫度和提高凍融穩(wěn)定性成為可能。為此，本研究利用RNA干擾技術，通過調控馬鈴薯塊莖中淀粉合成關鍵酶基因的

2、表達，從而改變馬鈴薯中淀粉的分子組成，并獲得具有淀粉糊化溫度低且凍融穩(wěn)定性好的加工型馬鈴薯品種。目前取得的結果有： （1）分別將GBSS基因啟動子和Patatin組織特異性啟動子驅動的GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因部分片段融合的植物表達載體pART-GF、pART-PF導入根癌農桿菌LBA4404，得到了含有靶標基因RNAi載體的農桿菌工程菌。 （2）選用馬鈴薯“L3”、“WS1”、“XD”和“Z”的莖段和葉片作為外植體材

3、料，在MS培養(yǎng)基基本成分的基礎上，對生長激素（NAA，6-BA和GA3）的濃度和配比進行了優(yōu)化，初步建立了優(yōu)化的馬鈴薯遺傳轉化體系。 （3）用攜帶植物表達載體的農桿菌對“L3”、“WSI”、“XD”和“Z”四個優(yōu)良馬鈴薯品種進行了遺傳轉化，通過抗性篩選初步獲得了抗性植株。 （4）通過半定量RT-PCR分析，對轉基因馬鈴薯植株中的內源GBSS基因的轉錄水平進行了分析，結果GBSS基因的轉錄物只有非轉基因植株中的1/3。淀粉