熒光定量PCR檢測(cè)仔豬斷奶前后水通道蛋白基因mRNA表達(dá)差異.pdf

1、水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）是指一類可以選擇性高效轉(zhuǎn)運(yùn)水分子的細(xì)胞膜通道蛋白，研究表明水通道蛋白在消化道上皮細(xì)胞表達(dá)豐富，并參與腸內(nèi)黏液的分泌。采用仔豬超早期斷奶（SEW）技術(shù)而導(dǎo)致的仔豬腹瀉是早期斷奶仔豬最常見(jiàn)的、危害最大的問(wèn)題。因此明確水通道蛋白在斷奶仔豬腹瀉的發(fā)病機(jī)制中的作用，為臨床提供治療的理論依據(jù)，提高治療技術(shù)和手段顯得尤為重要。 本文以豬為研究對(duì)象，利用同源序列克隆原理設(shè)計(jì)引物進(jìn)行RT-PCR，對(duì)豬的

2、AQP2-11基因進(jìn)行克隆，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)ACTB、B2M1、GAPDH、HMBS、HPRT1、RPL4、SDHA、TBP1和YWHAZ 9個(gè)看家基因mRNA在仔豬不同組織中的表達(dá)水平，確定在仔豬不同組織中用于校正目標(biāo)基因表達(dá)量的最佳基因。然后應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)豬的Aqp1、3、7、8、10和11基因mRNA在斷奶前后的表達(dá)差異。結(jié)果如下： 1）克隆的豬AQPs家族基因包括Aqp2

3、、Aqp3、Aqp4、Aqp5、Aqp6、Aqp7、Aqp8、Aqp9、Aqp10和Aqp11，所對(duì)應(yīng)的NCBI登錄號(hào)為EU636238、EU161094、EU165525、EU192130、EU620575、EU024116、EU220426、EU220427、EU582021和EU220425。序列分析結(jié)果表明：豬AQPs家族基因各自的選擇通透性符合四個(gè)亞家族的分類標(biāo)準(zhǔn)。 2）看家基因的表達(dá)穩(wěn)定性為HMBS和HPRTI>RP