實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)腎移植患者PBL細(xì)胞因子mRNA表達(dá)研究.pdf

1、本文研究了腎移植術(shù)后早期患者和CAN患者的免疫狀態(tài)以及環(huán)孢素A效用，探討TGF-β1與CAN和CsA之間的關(guān)系，對(duì)比ELISA檢測(cè)腎移植患者外周血IL-2與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PBLIL-2mRNA表達(dá)結(jié)果的吻合性和準(zhǔn)確性。 材料與方法:利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，檢測(cè)32例腎移植(KT)患者術(shù)前、術(shù)后3、7、14、28d外周血淋巴細(xì)胞(PML)有關(guān)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)，對(duì)于1例DGF患者和2例AR患者附加發(fā)病后檢測(cè)。對(duì)其中的

2、20例CsA服用者，術(shù)后7d附加CsA服用后2h(C2)時(shí)間檢測(cè)以及CsA空腹(C0)、C2濃度測(cè)定；利用雙夾心抗體ELISA法測(cè)定術(shù)前、術(shù)后7dC0和C2時(shí)間外周血IL-2水平。同時(shí)取10例常規(guī)手術(shù)患者作為對(duì)照(OC)，進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。選取15例CAN和22例非CAN患者，按CsA或MMF分組，行PBL有關(guān)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)檢測(cè)，同時(shí)測(cè)定其中的20例患者的外周血IL-2水平。 結(jié)果:KT組和OC組術(shù)前細(xì)胞因子mRNA表達(dá)無明顯

3、差異；KT組術(shù)后IL-10mRNA表達(dá)高于OC組(P＜0.05)，而IL-2、IFN-γmRNA術(shù)后第7天的表達(dá)明顯低于OC組。2例早期AR患者IL-2、IL-10、IFN-γ、TGF-β1mRNA表達(dá)于AR發(fā)生前后均增強(qiáng)，以IL-2mRNA表達(dá)增強(qiáng)最為明顯。術(shù)后7d，C2對(duì)應(yīng)的IL-2、IFN-γmRNA抑制率分別為(69.47±7.09)％和(65.95±8.15)％；C2濃度與IL-2、IFN-γmRNA的抑制率有相關(guān)性，R2分別

4、為0.53和0.31，P分別＜0.01和＜0.05：C0與IL-2、IFN-γmRNA的抑制率無相關(guān)性。CAN組IL-2、IL-10mRNA表達(dá)低于非CAN組，而IFN-γ、TGF-β1mRNA表達(dá)明顯高于非CAN組，P＜0.01。CsA組TGF-β1mRNA表達(dá)高于FK506組，P＜0.01；TGF-β1mRNA表達(dá)與移植腎功能呈負(fù)相關(guān)，P＜0.01。外周血IL-2水平與PBLIL-2mRNA表達(dá)在術(shù)前和術(shù)后1～5年呈正相關(guān)，R2分別

5、為0.58和0.39，P均＜0.01；在術(shù)后7dC0及C2時(shí)間缺乏相關(guān)性，R2分別為0.16和0.08，P均＞0.05。術(shù)后7d，C2對(duì)應(yīng)的IL-2抑制率明顯低于IL-2mRNA表達(dá)抑制率，P＜0.01；C2與IL-2抑制率缺乏相關(guān)性，R2=0.05，P＞0.05；IL-2mRNA表達(dá)抑制率與IL-2抑制率亦缺乏相關(guān)性，R2=0.09，P＞0.05。 結(jié)論:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PBL細(xì)胞因子mRNA表達(dá)可能是監(jiān)測(cè)腎移植患者免疫

6、狀態(tài)和判斷CsA效用的有效方法。Th1/Th2型細(xì)胞因子可能在AR和CAN發(fā)生發(fā)展中都具有重要作用，但機(jī)制可能有所不同；尚不能單純依據(jù)Th1/Th2細(xì)胞亞群漂移與否來判斷AR和CAN的發(fā)生發(fā)展。IL-2的過度抑制可能抑制T調(diào)節(jié)性細(xì)胞(Tr)的功能，進(jìn)而可能引起CAN的發(fā)生。CsA可能引起TGF-β1mRNA的高表達(dá)，這可能伴隨CAN的發(fā)生發(fā)展，并可能影響移植腎功能。外周血IL-2ELISA檢測(cè)與PBLIL-2mRNA表達(dá)檢測(cè)結(jié)果在腎移植