實(shí)時(shí)定量PCR監(jiān)測(cè)造血干細(xì)胞移植后BCR-ABL融合基因的表達(dá).pdf

1、目的：CML患者特別是加速期和急變期進(jìn)行移植的患者，在接受HSCT后由于體內(nèi)有殘留的白血病細(xì)胞，即MRD的存在仍會(huì)出現(xiàn)白血病復(fù)發(fā)。通過(guò)監(jiān)測(cè)CML患者Allo-HSCT后BCR/ABLmRNA轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化，檢測(cè)微小殘留病變，從而判斷預(yù)后、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)和實(shí)施早期干預(yù)治療。 方法：應(yīng)用Taqman熒光定量PCR方法，以β2-actin的mRNA作為內(nèi)參照，通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算BCR/ABLmRNA轉(zhuǎn)錄本拷貝數(shù)的相對(duì)值，NBC

2、R/ABL(％)=BCR/ABL拷貝數(shù)絕對(duì)值/β-actin拷貝數(shù)絕對(duì)值×100％。檢測(cè)10例初發(fā)CML患者及18例接受Allo-HSCT治療的CML患者，在移植前及移植后不同時(shí)段外周血中BCR/ABLmRNA轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平。 結(jié)果：實(shí)時(shí)定量PCR方法的最大靈敏度可達(dá)到10拷貝/μl，但重復(fù)性欠佳；而102～106拷貝/μl的范圍內(nèi)重復(fù)性良好。所有標(biāo)本內(nèi)參照β-actin表達(dá)良好，表明RNA無(wú)降解。10例初發(fā)CML患者BCR/A

3、BLmRNA表達(dá)水平：NBCR/ABL(％)：6.46(0.41～80.95)。8例患者移植后BCR/ABL拷貝數(shù)均較移植前下降，移植后一個(gè)月3/8轉(zhuǎn)為陰性，移植后兩個(gè)月5/8轉(zhuǎn)為陰性，移植3個(gè)月及其后的連續(xù)隨訪過(guò)程中檢測(cè)BCR/ABL基因表達(dá)全部為陰性，其他10名患者從移植后3個(gè)月起不同時(shí)段連續(xù)檢測(cè)BCR/ABL基因表達(dá)也全部為陰性。 討論：實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)CML患者的BCR/ABL融合基因，靈敏度高、穩(wěn)定性好，用于移植