茶樹低溫應(yīng)答相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子CsICE1和CsCBF1的研究.pdf

1、植物遭受低溫脅迫時，CBF轉(zhuǎn)錄因子通過與CRT/DRE順式作用元件結(jié)合來激活下游一系列冷誘導基因的轉(zhuǎn)錄表達，從而提高植物的抗寒性。ICE1是CBF上游的主要激活因子。為了闡明茶樹應(yīng)答低溫的分子基礎(chǔ)和調(diào)控機理，從整體水平上提高茶樹的抗寒性，并且為鑒定和選育茶樹抗寒品種提供分子水平上的理論依據(jù)，本論文進行了以下研究：
　　 （1）根據(jù)一段與擬南芥ICE1基因同源性較高的茶樹EST，采用RACE技術(shù)獲得了茶樹ICE1基因的cDNA全長

2、，命名為CsICE1。該基因（1964 bp）與其同系物一樣都含有保守的bHLH（堿性螺旋-環(huán)-螺旋）結(jié)構(gòu)域和C端區(qū)域。
　　 （2）根據(jù)GenBank上已有的序列信息，在茶樹中克隆出一個CBF基因，命名為CsCBF1。該基因（1210 bp）含有CBF轉(zhuǎn)錄因子家族典型的結(jié)構(gòu)域：AP2和其兩側(cè)的保守特征序列。
　　 （3）通過實時熒光定量PCR和半定量RT-PCR檢測CsICE1和CsCBF1在低溫誘導條件下的表達模式，

3、發(fā)現(xiàn)與擬南芥的ICE1和CBF表達模式相似。即：CsICE1在4℃處理后與20℃相比轉(zhuǎn)錄水平幾乎沒有變化；CsCBF1在常溫下（20℃）不表達，4℃處理后表達量快速而明顯大幅增加。
　　 （4）通過原核表達并純化得到帶有6個組氨酸標簽的CsCBF1融合蛋白。
　　 （5）采用凝膠遷移分析技術(shù)（EMSA）證明了CsCBF1蛋白可以與CRT/DRE順式作用元件特異性地結(jié)合。
　　 以上的研究結(jié)果表明：ICE1-CBF