大菱鲆紅體病虹彩病毒核酸疫苗及兩種海水名貴魚(yú)類疾病的研究.pdf

1、隨著人們對(duì)水產(chǎn)品需求量的增加,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)得到了快速發(fā)展。但大規(guī)模高密度養(yǎng)殖造成的水環(huán)境污染,致使水產(chǎn)病害日趨嚴(yán)重,特別是病毒性疾病造成的損失更加驚人。當(dāng)前,我國(guó)海水魚(yú)養(yǎng)殖者大多使用化學(xué)合成或抗生素類藥物治療疾病,但是由于藥物殘留、誘導(dǎo)抗藥性菌株以及水體污染等副作用,成為制約我國(guó)水產(chǎn)事業(yè)發(fā)展的瓶頸。與傳統(tǒng)疫苗相比,基因疫苗具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),比如生產(chǎn)成本低、可與其他免疫原組成多價(jià)疫苗、可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈而持久的免疫應(yīng)答等。目前,水產(chǎn)養(yǎng)殖界基因

2、疫苗的研究尚處于起步階段,國(guó)外主要集中在鮭魚(yú)、鱒魚(yú)類的IHNV、VHSV、SVCV、SHRV等傳染性病毒病的防治上。迄今未見(jiàn)有大菱鲆紅體病虹彩病毒基因疫苗的研究報(bào)道。本論文應(yīng)用生物信息學(xué),篩選出TRBIV25R(核糖核酸還原酶R2p小亞基)和TRBIV47R(血小板衍生生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族區(qū)域)兩個(gè)候選的抗原基因;應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建了兩種大菱鲆紅體病虹彩病毒基因疫苗:pVAX147R和pVAX125R并在草魚(yú)腎細(xì)胞CKI以及

3、模式動(dòng)物劍尾魚(yú)(Xiphophorushelleri)中進(jìn)行表達(dá)的研究,結(jié)果表明pVAX147R在細(xì)胞及劍尾魚(yú)體內(nèi)均能有效的表達(dá),在劍尾魚(yú)體內(nèi)能有效表達(dá)約40天,且在第20天左右表達(dá)量最高。而pVAX125R在細(xì)胞及劍尾魚(yú)體內(nèi)均無(wú)表達(dá);對(duì)注射pVAX147R的劍尾魚(yú)進(jìn)行了免疫效果評(píng)價(jià),結(jié)果表明注射該疫苗后劍尾魚(yú)的重要免疫相關(guān)基因IgM表達(dá)量顯著增高,說(shuō)明pVAX147R能有效刺激魚(yú)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答;對(duì)基因疫苗PVAX1-47在劍尾魚(yú)體內(nèi)的

4、表達(dá)時(shí)間及安全性進(jìn)行研究,并初步探討了其免疫機(jī)制。本文對(duì)大菱鲆紅體病虹彩病毒基因疫苗的生產(chǎn)應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)化提供了重要的理論依據(jù)。
　　 除此之外,作者還對(duì)七帶石斑魚(yú)(EpinephelusseptemfasciatusThunberg)、沙虎鯊(Carchariastaurus)兩種海水名貴魚(yú)類的疾病進(jìn)行研究。
　　 七帶石斑魚(yú)隸屬于鱸形目(Perciformes)、(魚(yú)旨)科(Serranidae)、石斑魚(yú)屬(Epinep

5、helus),是該屬中大型的石斑魚(yú)類。其肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美,深受消費(fèi)者的喜愛(ài)。日本和韓國(guó)消費(fèi)需求旺盛,是一種極具市場(chǎng)潛力的高檔名貴海水魚(yú)類品種。2009年6月初,某養(yǎng)殖場(chǎng)培育的一批七帶石斑魚(yú),部分稚魚(yú)開(kāi)始出現(xiàn)眼球內(nèi)部充氣,眼球突出,游動(dòng)緩慢等癥狀,隨著病癥的加重,稚魚(yú)開(kāi)始出現(xiàn)眼角膜白濁、失明、眼球脫落、體表泛紅、不進(jìn)食等癥狀,最終導(dǎo)致死亡。我們從患病的七帶石斑魚(yú)體內(nèi)分離出一株致病菌BY0081,研究了該菌株的致病性,分析了其生理生化指標(biāo)

6、和16SrDNA序列,將該菌株鑒定為假交替單胞菌(Pseudoalteromonassp.),并進(jìn)一步研究了其藥敏特性。該結(jié)果對(duì)防治由假交替單胞菌引起的魚(yú)類疾病有積極意義。
　　 沙虎鯊,又名錐齒鯊、戟齒砂鮫或戟齒錐齒鯊,是一種生活在海岸海域的鯊魚(yú)。2009年10月,山東某海底世界一條沙虎鯊因病意外死亡,我們對(duì)其致病因素從細(xì)菌、寄生蟲(chóng)、病毒多方面考察,最終確定其為弧菌(Vibrio)和淋巴囊腫病毒(Lvmphocvstisdis