喹噁啉類藥物及其代謝物致人源肝細胞毒性研究.pdf

1、喹噁啉-1，4-二氧化物類化合物具有優(yōu)良的促進動物生長和廣譜抗菌的作用，在國內外養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛使用，市場供求量巨大，主要代表藥物有喹乙醇、卡巴氧和喹烯酮等。由于潛在的致癌毒性，卡巴氧已經在很多國家和地區(qū)被禁止使用，在我國養(yǎng)殖業(yè)中，喹乙醇和喹烯酮市場占有率大，但毒性作用尤其是體外的細胞毒性研究報道較少，對由于兩藥殘留可能導致的人類損傷研究更是匱乏。以人源細胞毒性為對象，研究喹乙醇和喹烯酮及其代謝物的毒性，對揭示兩藥殘留可能引起的安全性問題

2、具有積極意義。為此，本文采用ChangLiver和L-02兩株人源肝細胞為生物材料，通過細胞生長抑制、細胞DNA損傷和流式細胞術等試驗，檢測喹噁啉類藥物中喹烯酮、喹乙醇及其主要代謝3-甲基喹噁啉-2-羧酸和脫二氧喹烯酮在不同作用劑量和作用時間下對肝細胞的影響。
　　 1、喹噁啉類藥物及其代謝物的制備
　　 在本實驗室已有的研究基礎上，采用鄰硝基苯胺等為反應起始原料，通過化學方法合成制備脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧

3、酸，并在合成過程中采用薄層色譜法監(jiān)測脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的合成反應過程，通過重結晶純化被分析的各種化合物，根據定量分析中的面積歸一化法，采用高效液相色譜儀測定喹烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的百分含量。試驗結果表明：喹烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸的百分含量分別為98.50％、99.28％、98.88％和99.50％，基本滿足毒理學試驗要求。
　　 2、喹噁啉類藥物及

4、其代謝物對人源肝細胞增殖影響
　　 采用ChangLiver和L-02兩株人源肝細胞為生物材料，通過細胞生長抑制試驗和興奮效應試驗觀測四種化合物在不同作用劑量和作用時間下對肝細胞生長的抑制率，及其是否具有興奮效應。結果顯示：高劑量喹烯酮和喹乙醇對ChangLiver細胞作用24h的最高抑制率分別達73.29％和31.88％，對L-02細胞作用24h的最高抑制率分別達76.51％和39.70％；同時，高劑量脫二氧喹烯酮和3-甲基喹

5、噁啉-2-羧酸對ChangLiver細胞作用24h的最高抑制率分別達20.02％和21.58％，對L-02細胞作用24h的最高抑制率分別達34.49％和22.29％。四種化合物對兩細胞均有抑制作用，且呈現劑量和時間依賴性；興奮效應除30μg/mL喹烯酮對L-02細胞組的OD值與對照組顯著差異外，其他刺激組與對照組無顯著差異。
　　 3、喹噁啉類藥物及其代謝物致人源肝細胞DNA損傷的研究
　　 采用單細胞凝膠電泳試驗觀察喹

6、烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸對人員肝細胞DNA的損傷情況。結果顯示：喹烯酮和喹乙醇均可顯著誘導ChangLiver和L-02兩株細胞的DNA損傷（P<0.01），且喹乙醇導致的損傷比喹烯酮嚴重。脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸高劑量組也可顯著誘導兩株細胞的DNA損傷（P<0.01），且脫二氧喹烯酮致兩株細胞的損傷均比3-甲基喹噁啉-2-羧酸嚴重，但是二者均較喹烯酮和喹乙醇毒性小。
　　 4、喹噁啉類

7、藥物及其代謝物對人源肝細胞周期的影響
　　 采用流式細胞術檢測喹烯酮、喹乙醇、脫二氧喹烯酮及3-甲基喹噁啉-2-羧酸對人ChangLiver和L-02細胞周期的影響。結果顯示：喹烯酮和喹乙醇對細胞作用4h后，ChangLiver和L-02細胞的周期均有改變，G0/G1期細胞百分率均較對照組高，兩細胞均出現了G0/G1期阻滯現象；而代謝物脫二氧喹烯酮和3-甲基喹噁啉-2-羧酸對細胞作用4h后，兩個細胞的周期也發(fā)生改變，對Chang