喹噁啉類及其代謝物對畜禽代表性病原微生物抑制活性研究.pdf

1、在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，威脅畜禽甚至人類健康的病原菌以及耐藥致病菌不斷出現(xiàn)，但是目前常用的藥物抗菌活性日益降低，因此迫切需要研發(fā)新的抗菌藥物。喹噁啉類化合物是一類人工合成的獸用抗菌藥，其代表藥物卡巴氧、喹乙醇、喹烯酮和乙酰甲喹曾有著廣泛應用。已有的研究表明喹噁啉類對多種畜禽常見的致病菌具有抑制作用，特別是對大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、豬痢疾短螺旋體等的作用較強。喹賽多是近年來研發(fā)的喹噁啉類新品種，有抗菌譜廣、毒性低、促生長作用

2、顯著等優(yōu)點，可以作為卡巴氧、喹乙醇的替代藥物。根據(jù)國外最新的研究報道發(fā)現(xiàn)，喹噁啉類還有其它的一些抗菌活性，因此喹噁啉類藥物還有許多潛在的抗微生物活性有待發(fā)掘。本課題選取喹噁啉類中的喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹為代表，以支原體、真菌、結(jié)核桿菌和病毒為研究對象，研究了喹噁啉類及其主要代謝物對畜禽特殊病原微生物的抑制活性，完善了喹噁啉類的抗菌譜。同時還進行了喹噁啉類和相關(guān)藥物對支原體、結(jié)核桿菌的聯(lián)合藥敏試驗，篩選出了聯(lián)合抗菌活性較好的藥物組合，這

3、將為喹噁啉類藥物的合理應用以及進一步推廣應用提供科學依據(jù)。
　　1.喹噁啉類藥物對真菌的MIC測定
　　在標準條件下采用微量稀釋法測定喹噁啉類及其主要代謝物對8個屬14株致病性真菌（白色念珠菌、熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、新型隱球菌、煙曲霉菌、犬小孢子菌、紅色毛癬菌和絮狀表皮癬菌）的最小抑菌濃度(Minimum inhibitoryconcentration，MIC)。同時測定了在厭氧條件下喹噁啉類藥物對深部真菌的MIC值。測

4、得在有氧條件下喹噁啉類三個原型藥物中，喹賽多對新型隱球菌的MIC值為16μg/mL，喹烯酮對犬小孢子菌MIC值可達到8μg/mL。試驗結(jié)果顯示喹烯酮僅能抑制淺表真菌生長，而喹賽多對深部真菌和淺表真菌均有一定抑制作用。喹噁啉類主要代謝物對受試真菌沒有顯示出抑制活性，推測原因可能是喹噁啉環(huán)上缺少兩個氮氧基團。在厭氧條件下，喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹對深部真菌的MIC值略有降低。
　　2.喹噁啉類藥物對支原體的MIC測定及聯(lián)合藥敏試驗

5、r>　　在標準條件下采用微量稀釋法測定喹噁啉類及其主要代謝物對支原體（雞毒支原體和豬肺炎支原體）的MIC，然后采用棋盤法進行聯(lián)合藥敏試驗。測得喹烯酮、喹賽多和乙酰甲喹對受試支原體的MIC值為8-32μg/mL，其中喹烯酮對雞毒支原體BG44T株的MIC值為8μg/mL。喹噁啉類主要代謝物對兩種支原體沒有顯示出抑制活性，推測原因可能是喹噁啉環(huán)上缺少兩個氮氧基團。對雞毒支原體的聯(lián)合藥敏試驗中，喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹與四環(huán)素的聯(lián)合作用的部分

6、抑菌濃度指數(shù)(Fractional inhibitory concentration index，F(xiàn)IC)最低，可達到0.75，為相加作用。試驗結(jié)果顯示三種藥物對支原體有一定抑制作用，并且可以與四環(huán)素進行配伍使用。
　　3.喹噁啉類藥物對結(jié)核桿菌的MIC測定及聯(lián)合藥敏試驗
　　在標準條件下采用MTT法測定喹噁啉類及其主要代謝物對結(jié)核桿菌(牛分支桿菌、結(jié)核桿菌H37Ra和H37Rv)的MIC，然后采用棋盤法進行聯(lián)合藥敏試驗。測

7、得喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹對牛分枝桿菌和結(jié)核桿菌強毒株H37Rv的MIC值為4-8μg/mL。喹噁啉類主要代謝物對兩種結(jié)核桿菌均沒有抑制活性，推測原因可能是喹噁啉環(huán)上缺少兩個氮氧基團。對結(jié)核桿菌的聯(lián)合藥敏試驗中，喹賽多、喹烯酮和乙酰甲喹與利福平的聯(lián)合作用的FIC指數(shù)最低，可達到0.75，為相加作用。試驗結(jié)果顯示三種藥物對受試結(jié)核桿菌均有較好的抑制活性，并且可以與利福平進行配伍使用。
　　4.喹噁啉類藥物對病毒的抑制活性試驗

8、　　采用細胞病變法和MTT法測定喹噁啉類及其主要代謝物對豬細小病毒、豬藍耳病毒以及雞傳染性法氏囊病毒的抑制活性。結(jié)果測得在三種不同作用方式下，喹噁啉類及其主要代謝物均不能對相應細胞起保護作用。因為豬瘟病毒在體外增殖不能使細胞產(chǎn)生病變，所以本試驗建立了SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法定量檢測病毒液中豬瘟兔化弱毒株的拷貝數(shù)，通過比較加藥前后病毒增殖曲線的差異來判斷喹噁啉類藥物是否具有抑制豬瘟病毒增殖的活性。結(jié)果測得加藥前后病毒增殖曲